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目的:干细胞移植、基因治疗在心血管疾病领域显示出其广阔的前景。心肌干细胞(cardiac stem cells,CSCs)是一类具有增殖和分化为功能性心肌细胞潜能的祖细胞。它在心肌梗死和终末期心脏病的治疗上可能有巨大的潜能。但因其增殖能力相对较弱、诱导分化后凋亡较快限制了其使用。研究表明,整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)可抑制血管内皮细胞、内皮祖细胞、神经细胞等多种细胞的凋亡,同时具有促进细胞增殖的作用。
本研究从小鼠心脏中分离提取、分选纯化CSCs,将其转染ILK促进其高表达,通过测定其转染前后的增殖、凋亡水平以及其迁移能力的变化,目的是寻找改善CSCs功能的可能方法,为其临床应用提供理论知识和基础。
方法:(1)应用酶消化法从C57BL/6成年小鼠心脏组织中分离心肌细胞,经免疫磁珠法(MACS)分选纯化sca-1+心肌干细胞,光学显微镜下观察其细胞形态,流式细胞仪测定其分选纯度,传代培养后体外扩增。(2)将ILK基因转染至心肌干细胞,将未转染细胞作为对照,分别用MTT法测定其增殖,Annexin V/PI双染法测定其凋亡,Transwell法测定其迁移能力。
结果:(1)C57BL/6小鼠心肌干细胞从光学显微镜下观察是体积小、折光性强的圆形细胞。免疫磁珠法MACS可分选纯化出高纯度、典型的干细胞。(2)与对照组比较,心肌干细胞转染ILK基因后,增殖能力增强、凋亡率减低、迁移能力增强。
结论:(1)免疫磁珠法能分选纯化高纯度的sca-1+心肌干细胞,这种细胞为折光性强的小圆细胞。(2)ILK转染的心肌干细胞增殖能力增加、凋亡水平降低、迁移能力增强。