目的：通过用异型双功能化学偶联剂MBS作为两种蛋白间的连接剂，制备新型免疫毒素VEGF IgG-CRM9，为肿瘤靶向治疗奠定基础。 方法：分别应用双功能连接剂MBS和N-琥珀酰亚胺3-(2-吡啶二巯基)丙酸盐(SPDP)将兔抗人IgG和白喉毒素突变体(CRM9)进行连接，制备新型偶联蛋白的预试验。结合后的蛋白经Sephacryl S-300分离纯化后，用聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖电泳证明二者的结合情况。采用酶联免疫法检测IgG与CRM9按不同比例反应后所构建的蛋白复合体中抗体部分的活性。根据预试验的结果，采用MBS作为偶联剂，两种蛋白的比例为1：1制备免疫毒素VEGF IgG-CRM9，并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳来验证两种蛋白的结合情况。用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)技术来检测VEGF IgG-CRM9的抗血管作用，并间接证明抗体的活性，采用MTT细胞毒性试验检测VEGF IgG-CRM9的抗体导向作用及毒素部分的活性。 结论：IgG与CRM9可以通过MBS结合，二者在1：1-1：3之间的比例时，可以有较好的连接，而且对抗体活性的影响最小。偶联后的VEGF IgG-CRM9的抗体活性未受到影响，并可以有效的达到抑制血管生长的作用。SPDP则不适用于本实验中的两种蛋白的连接。