两种五加属植物叶中抗HMGB1三萜活性成分研究

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五加科五加属植物,民间俗称“五加皮”,大多有滋补、抗疲劳、抗风湿、活血化淤等功效。前期研究表明该属植物叶多含具有抗肿瘤、抗艾滋病毒、抗炎以及抗菌等活性的羽扇豆烷型三萜。基于五加属植物丰富的资源和在传统医药领域上的广泛应用,本论文对细柱五加和糙叶五加两种五加属植物叶的活性成分分析、分离及抗炎活性进行了系统研究。本论文首先综述了天然产物中羽扇豆烷型三萜化合物的波谱特征,以期为该类化合物的研究开发特别是结构鉴定提供参考。第二章采用现代分离分析技术,对细柱五加叶的化学成分进行研究。经热甲醇提取、溶剂萃取、柱层析分离及重结晶等方法,从湖南产细柱五加叶的热甲醇提取物中分离得到10个化合物。通过理化常数和各种波谱方法鉴定了他们的结构,分别为羽扇豆烷型三萜化合物impressic acid (1),3α,11α-dihydroxy-23-oxo-lup-20(29)-en-28-oic acid (2),3α,11α,23-trihydroxy-lup-20(29)-en-28-oic acid (3),五加苷元(4),3-O-β-D-glucopyranosyl3α,11α-dihydroxylup-20(29)-en-28-oic acid (5), acantrifoside A (6), acankoreoside D (7), acankoreoside B (8)和五加苷(9)以及黄酮类化合物芦丁(10)。其中化合物1-3和化合物5是首次从细柱五加中分离得到。论文第三章对细柱五加中分离得到的9个羽扇豆烷型三萜化合物的细胞毒和抗HMGB1活性进行了研究。结果显示所有化合物在浓度低于50μmol/L时基本无细胞毒性,且部分化合物对TNF-α、IL-1β和HMGB1有较好的抑制效果,在细柱五加叶中含量丰富,有望开发新的抗HMGB1药物,为治疗重型肝炎、风湿病提供直接药物或先导物质。在研究细柱五加叶中羽扇豆烷型三萜活性成分的基础上,对同属五加属的糙叶五加叶进行了系统研究。首先,采用DPPH法对糙叶五加叶不同极性部位的抗氧化活性进行了研究,其抗氧化能力大小为乙酸乙酯>正丁醇>石油醚,抗氧化活性可能来自糙叶五加叶中的多酚、黄酮、绿原酸等化合物。其次,首次建立了同时检测糙叶五加叶中槲皮素和山柰酚的HPLC定量分析方法。采用RP-HPLC,色谱柱为AT.LICHROM ODS-C18柱(250×4.6mm,5μm),以MeOH:H3PO4: H2O (50:0.2:49.8)为流动相,柱温30℃,流速1.0mL/min,检测波长360nm,进样量10μL。经方法学验证,所建立的HPLC稳定性好、准确性高,适用于糙叶五加中槲皮素和山柰酚的定量分析。同时,对糙叶五加中的槲皮素、山柰酚、金丝桃苷和芦丁进行了含量测定。最后,经溶剂提取、萃取、柱层析分离、重结晶等方法,从湖南产糙叶五加叶中分离得到一个油状物和10个单体化合物。采用现代波谱手段及与己知化合物的文献数据比较,分别鉴定为有机酸类化合物三十烷酸(12),三十二烷酸(13),三十四烷酸(14),棕榈酸(16);甾体类化合物豆甾醇(15)和胡萝卜苷(17),黄酮类化合物槲皮素(18)、山柰酚(19)、金丝桃苷(20)和芦丁(21)。以上化合物均为首次从糙叶五加中分离得到。本论文的研究结果对从五加属植物中寻找更多新的三萜活性物质、细柱五加和糙叶五加的综合利用开发、以及植物化学分类学提供了重要的理论依据;为开发新的抗HMGB1药物及治疗重型肝炎、风湿病的直接药物或先导物质提供了重要的研究基础;为羽扇豆烷型三萜活性及构效关系研究提供新的理论基础;对我国天然植物资源的开发利用以及中草药现代化研究具有一定的参考价值。
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