【摘 要】
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肌肉和脂肪细胞的增殖和分化水平与动物体的生长和发育密切相关,是影响肉质的关键因素。长链非编码RNA（lncRNA）可以与微小RNA（mi RNAs）海绵参与许多重要的生物过程。课题组前期测序得到的新的lncRNA TCONS＿00056481,cis作用预测其靶基因为IRS1。在此基础上,为研究lncRNA竞争性结合mi RNA调控靶基因对猪前体脂肪细胞增殖和分化过程的影响,首先通过生物信息学分析
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（编号:31972531）； 中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化国家重点实验室2015年开放课题（编号:GREKF15-03）； 安徽省科技重大专项（编号:17030701061）； “十二五”农村领域国家科技计划课题（编号:2015BAD03B01）；
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肌肉和脂肪细胞的增殖和分化水平与动物体的生长和发育密切相关,是影响肉质的关键因素。长链非编码RNA（lncRNA）可以与微小RNA（mi RNAs）海绵参与许多重要的生物过程。课题组前期测序得到的新的lncRNA TCONS＿00056481,cis作用预测其靶基因为IRS1。在此基础上,为研究lncRNA竞争性结合mi RNA调控靶基因对猪前体脂肪细胞增殖和分化过程的影响,首先通过生物信息学分析找到与lncRNA TCONS＿00056481、IRS1均存在靶向关系的mi R-660。其次通过实时荧光定量PCR（qPCR）技术检测lncRNA TCONS＿00056481、mi R-660和IRS1在安庆六白猪和大白猪中心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌以及背部脂肪的组织表达谱;通过Western Blots检测安庆六白猪和大白猪背部脂肪组织中的IRS1的蛋白表达。再次通过双荧光素酶实验验证lncRNA TCONS＿00056481和mi R-660之间以及mi R-660与IRS1之间的直接靶向关系。最后采用siRNA技术沉默lncRNA TCONS＿00056481、IRS1,生物合成mi R-660模拟物和mi R-660抑制剂,分别感染猪前体脂肪细胞,通过MTT法检测猪前体脂肪细胞的增殖以及检测Cyclin D和p21的表达水平,经分化诱导后再通过qPCR检测成脂标志基因PPAR-γ和C/EBP-α的表达水平。主要研究结果如下:（1）qPCR结果表明,lncRNA TCONS＿00056481和IRS1在安庆六白猪背部脂肪组织中的表达水平极显著高于大白猪（P＜0.01）,而mi R-660在安庆六白猪背部脂肪组织中的表达水平极显著低于大白猪（P＜0.01）;Western Blots结果表明IRS1蛋白在安庆六白猪背部脂肪组织中的表达水平极显著高于大白猪（P＜0.01）。（2）双荧光素酶验证结果表明,mi R-660与lncRNA TCONS＿00056481存在靶向关系,同时mi R-660与IRS1也存在靶向关系。（3）增殖情况:干扰lncRNA TCONS＿00056481和IRS1以及加入mi R-660模拟物,抑制猪前体脂肪细胞的增殖水平,显著下调靶基因IRS1表达水平,显著下调增殖关键基因Cyclin D表达水平,显著上调p21表达水平。（4）分化情况:干扰lncRNA TCONS＿00056481和IRS1以及加入mi R-660模拟物,显著下调靶基因IRS1表达水平,显著下调成脂基因PPAR-γ和C/EBP-α表达水平。综上所述,lncRNA TCONS＿00056481竞争性结合mi R-660调控IRS1促进猪前体脂肪细胞的增殖和分化。
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