【摘 要】
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钩吻属于常绿藤本葫蔓藤,已知有抗癌、镇静、消炎等药理功效。钩吻对动物具有促生长、复壮等作用,在畜牧养殖领域具有良好的应用前景。目的:在研究钩吻促生长作用中发现钩吻提取物能通过影响小猪肠道活动来发挥功效。本实验以钩吻素子为研究药物,以猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象探究钩吻对猪肠道生理状态的调节作用及相关机制。为开发钩吻成为饲料添加剂这一构想提供依据。方法:通过分子生物学实验探究钩吻素子与
【基金项目】
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湖南省兽药工程技术研究中心; 国家重点研发计划专项:畜禽用新剂型研制开发(编号:2017YFD0501403);
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钩吻属于常绿藤本葫蔓藤,已知有抗癌、镇静、消炎等药理功效。钩吻对动物具有促生长、复壮等作用,在畜牧养殖领域具有良好的应用前景。目的:在研究钩吻促生长作用中发现钩吻提取物能通过影响小猪肠道活动来发挥功效。本实验以钩吻素子为研究药物,以猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象探究钩吻对猪肠道生理状态的调节作用及相关机制。为开发钩吻成为饲料添加剂这一构想提供依据。方法:通过分子生物学实验探究钩吻素子与猪小肠上皮细胞生理状态间的关联。采用MTT法、实时荧光定量PCR、流式细胞术、细胞划痕实验、蛋白质免疫印(WB)来检测钩吻素子对IPEC-J2的细胞活力、肠功能相关基因表达、细胞迁移速度、胞内钙离子浓度,钙转运蛋白表达的影响,探究钩吻素子对猪小肠上皮细胞的作用及相关机制。结果:12.5-100μM钩吻素子能增强IPEC-J2细胞活性,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。和对照组相比较,200μM钩吻素子能上调IPEC-J2中组胺受体(H1HR)基因表达,差异有极显著性(P<0.01);100、200μM钩吻素子能上调5-羟色胺受体(5-HT4R)基因表达,差异有极显著性(P<0.01);钩吻素子对毒蕈碱受体M3型(CHRM3)基因表达的影响无统计学意义。50μM、100μM、200μM钩吻素子能增高IPEC-J2胞内Ca2+浓度,与对照组比较有极显著性差异(P<0.01)。细胞划痕实验开始后6h、12h、24h,实验组中伤口愈合程度高于对照组,细胞迁移比对照组。作用于IPEC-J2后,钩吻素子能上调Calbindin蛋白表达,与对照组相比较,100μM剂量组差异有显著性(P<0.05),200μM剂量组差异有极显著(P<0.01);50、100μM钩吻素子能显著上调IP3R蛋白表达(P<0.05),200μM钩吻素子极显著上调IP3R蛋白表达(P<0.01);50、100、200μM钩吻素子能显著上调TRPV4蛋白表达(P<0.05)。结论:钩吻素子能增加IPEC-J2中H1HR、5-HT4R基因表达,通过调节肠上皮中H1HR、5-HT4R的表达影响肠粘膜修复、电解质转运和神经递质的分泌。钩吻素子能促进IPEC-J2细胞迁移,有助于维持肠道物理屏障的完整性。钩吻素子使IPEC-J2中游离Ca2+浓度升高,上调细胞中Calbindin、IP3R、TRPV4的蛋白表达。钩吻素子能调节Ca2+转运和吸收,激活肠上皮中电压依赖性Ca2+通道,激活细胞内Ca2+释放通道,使肌浆网释放Ca2+,胞外Ca2+的内流。从而够影响肠道运动和肠壁吸收能力。该研究能为探明钩吻素子对猪小肠上皮细胞作用及相关机制提供思路。
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