论文部分内容阅读
背景:阿片类药物主要用于治疗中、重度疼痛,但是它们还能够在机体内产生促伤害感受作用,导致机体对疼痛的敏感性增高,即阿片诱导的痛觉过敏,尤其是超短效的瑞芬太尼更容易发生。许多试验证实,钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinasesⅡ,CaMKII)在多种类型痛觉过敏的形成和维持过程中非常重要。但CaMKⅡ是否参与瑞芬太尼诱导的痛觉过敏,尚不清楚。
目的:研究在停止静脉输注瑞芬太尼后的不同时间点,大鼠大脑皮质S1区,海马和脊髓后角中CaMKⅡ蛋白表达量的改变,探讨其在瑞芬太尼诱导痛觉过敏中的作用,为临床实践提供理论依据。
方法:1.行为学:选取SD雄性成年大鼠,随机分成对照组、大剂量瑞芬太尼组和低剂量瑞芬太尼组;测量各组大鼠的缩足反应阈基础值:通过鼠尾静脉分别输注生理盐水、大剂量瑞芬太尼(负荷量是6μg·kg-1,持续输注量是2.5μg·kg-1·min-1,药物浓度是20μg/ml)或低剂量瑞芬太尼(负荷量是1.5μg.kg-1,持续输注量是0.6pg·kg-1·min-1,药物浓度5μg/ml)2h;测量各组大鼠在停药后即刻、停药后0.5h、停药后2h、停药后5h及停药后24h的缩足反应阈。2.蛋白免疫印迹(Westem blot):选取SD雄件成年大鼠,随机分为对照组和停药后即刻、0.5h、2h、5h、24h组;通过鼠尾静脉输注生理盐水或上述大剂量瑞芬太尼2h;在输注后不同时间点处死,提取腰膨大脊髓后角、大脑皮质S1区和海马组织;应用Western blot技术检测上述部位组织中的T-CaMKⅡ和p-CaMKⅡ水平。3.免疫组化:选取SD雄性成年大鼠,随机分成对照组和大剂量瑞芬太尼组;通过鼠尾静脉输注生理盐水或上述大剂量瑞芬太尼2h;停止输注0.5h后用10%中性福尔马林灌注并制成石蜡切片,应用免疫组化技术观察p-CaMKⅡ在大鼠大脑皮质S1区、海马CA1区和腰膨大脊髓后角中的表达。
结果:1.行为学:输注大剂量瑞芬太尼后,在停药后即刻、0.5h和2h时的缩足反应阈值较基础值显著降低(p＜0.05)。2.蛋白免疫印迹:输注大剂量瑞芬太尼后,大脑皮质S1区、海马和脊髓后角中的p-CaMKⅡ在停药后即刻、0.5h及2h时显著升高(p＜0.05),T-CaMKⅡ在输注后无显著性变化。3.免疫组化:停止输注大剂量瑞芬太尼0.5h后大脑皮质S1区、海马CA1区和脊髓后角中p-CaMKⅡ免疫染色显著增强(p＜0.05),p-CaMKⅡ阳性细胞显著增多(p＜0.05)。
结论:瑞芬太尼能够引起大鼠中枢神经系统特定部位的CaMKⅡ磷酸化水平显著升高,但时效不长。