水胡桃种子化学成分的分离与鉴定

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胡桃科(Juglandaceae)枫杨属(Pterocarya)植物广泛分布于我国大部分地区,枫杨的叶和树皮在民间常用作中草药,具有丰富的药理活性,如去痛消肿、抑菌敛疮和解热杀虫等。目前国内外已开展了多种枫杨属植物的系统研究,尤其是对东京枫杨和湖北枫杨的树叶及树皮的成分及活性研究报道较多。水胡桃(Pterocarya rhoifolia)是枫杨属植物的一种,在国内仅分布于山东省的部分地区,目前对水胡桃及其种子的成分及活性研究鲜有报道。为进一步明确枫杨属植物的化学成分并从中获得单体活性物质,本文对枫杨属植物水胡桃种子的化学成分进行了分离纯化及活性研究。主要研究内容和结果如下:(1)水胡桃种子粗提物的活性初筛。将水胡桃种子用75%乙醇浸提后得乙醇粗提物,再用三种不同极性的有机溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取得到三个极性部位,分别对其进行抗氧化、抗炎、抗菌及抗肿瘤活性的初步探究,结果显示乙酸乙酯萃取粗提物的活性表现最强。(2)对水胡桃种子乙酸乙酯萃取粗提物进行系统的分离纯化研究。采取多种生化分离方法对乙酸乙酯相提取物进行多次分离纯化,最终得到4个单体化合物,对其进行结构鉴定和理化性质分析,确定四种化合物分别为萘醌类物质(4S)-4,8-二羟基-1-四氢萘酮(62 mg)、4-甲氧基-5-羟基-1-四氢萘酮(13 mg)、三萜类化合物枫杨酸(Pterocarinic acid,8 mg)及甾醇类化合物β-谷甾醇(22 mg)。对其中的单体化合物(4S)-4,8-二羟基-1-四氢萘酮采用MTT法进行了抗肿瘤活性检测,结果表明其对人体肝癌细胞Hep-G2的增殖表现出了一定的抑制作用,在其浓度为10μg/m L时,抑制率接近30%,IC50值为127.1μg/m L。(3)为全面探讨水胡桃种子的化学成分,对水胡桃种子石油醚提取物采用气相色谱与质谱联用技术鉴定其挥发性成分。检测结果显示通过索氏提取法获得的水胡桃种子石油醚相粗脂肪的主要成分为多种脂肪酸,如棕榈酸的相对含量为28.38%、亚油酸的相对含量为18.97%、十四酸(也称肉豆蒄酸)的相对含量为3.52%、油酸为18.39%、硬脂酸为10.17%等。各种烷烃所占的比例也很大,此外还含有一定量的烯烃、甾醇等化合物。(4)水胡桃种子萘醌类成分提取条件进行优化。以水胡桃种子中萘醌类成分为提取对象,通过乙醇浸泡得粗提液,采用单因素试验和响应面法对萘醌类成分提取参数进行优化,确定其最佳提取条件为料液比1:25,提取时间7 h,提取温度60℃,按此条件进行萘醌类成分提取,得率为14.32 mg.g-1。
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