乳铁蛋白（LTF）是一种分子量为80KD的可溶性铁离子结合糖蛋白，属于转铁蛋白家族一员，具有多种生物学功能，如抑制细菌生长、抗真菌、抗肿瘤、抗病毒及免疫调节。LTF特异性抗体是抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）的一种，常见于自身免疫性疾病患者血清中。本实验室前期研究发现RA患者血清中乳铁蛋白免疫复合物（LTF-IC）的含量显著升高，且从RA病人血浆置换液中纯化的抗LTF抗体与LTF结合形成的免疫复合物在体外能够活化人单核细胞释放TNF-?。应用兔抗LTF多克隆抗体L3262与LTF形成的免疫复合物也能够强烈刺激人单核细胞释放TNF-?、IL-1β、IL-8等。　　为了对LTF-IC的免疫生物学活性做更为深入细致的研究，我们通过杂交瘤细胞融合技术制备了一株小鼠抗LTF的单克隆抗体，并证实该抗体与LTF形成的复合物同样能够诱导单核细胞释放促炎性细胞因子。本课题就LTF-IC活化单核巨噬细胞的分子机制、信号转导通路，尤其是 LTF-IC与病原体模式分子（LPS）之间的协同作用机制进行探讨，力争发现RA发病的新机制，为寻找可用于临床早期诊断的生物标志物和免疫治疗的新靶点奠定基础。　　本研究的主要发现包括：（1）免疫复合物与LTF及LPS的协同作用诱导人单核细胞促炎性细胞因子的释放，该过程依赖CD14，TLR4和FcγRⅡa的激活。（2)LTF-IC激活单核巨噬细胞过程有赖于脂筏结构的完整和参与。通过共聚焦及提取脂筏发现 LTF-IC可诱导相应受体募集至脂筏结构，且脂筏破坏剂 M-β-环糊精（MβCD）能够抑制LTF-IC活化单核细胞释放TNF-?。（3）固相化IgG协同LTF和 LPS作用的 mir-221-3p-SOCS1/SOCS3-p65通路。通过抑制剂干预以及western-blot方法发现LTF-IC活化单核细胞依赖FcγRⅡa下游的Src激酶和Syk激酶的活化，进而诱导 PI3K发生磷酸化，与 TLR4介导的信号通路共同激活下游MAPK以及NF-κB，但不依赖于对Akt的激活。　　对比TLR4介导NF-κB信号通路的时间曲线，LTF-IC对NF-κB的激活在程度以及持续时间上均显著增强，提示FcγRIIa介导的协同信号很可能影响了TLR4信号通路激活后相应的负调控基因的表达。进一步研究发现，LTF-IC处理细胞后TLR4下游的负调控基因 SOCS1、SOCS3显著下调，这可能解除了这些负调控基因对 NF-κB的负反馈调节，导致 p65的活化及延长磷酸化。高通量测序结果及Q-PCR验证表明LPS或LTF协同c-IgG活化单核细胞能够显著上调mir-221-3p的表达，其主要靶向分子是SOCS1、SOCS3等负调控基因。（4）LTF-IC下调TNFR的表达，而LPS上调了TNFR的表达。　　总之，在本研究中我们利用新制备的LTF单克隆抗体阐明了LTF-IC活化人单核细胞的分子机制，提出Fc?RIIa激活的负调控基因可能是LTF-IC具有超强免疫刺激活性的重要原因。这一工作为研究自身免疫疾病的发病机理呈现了新的思路，并提供一个可能有效的诊断RA的方法。