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目的 脑血管病具有发病率高、致残率高、死亡率高的“三高”特点,是威胁人类尤其是中老年人健康的常见病、多发病。在世界与我国人口老龄化趋势日益加速的情况下,脑血管病的危害性亦必然日益突出,其中又以缺血性脑血管病最为多见,因此,缺血性脑血管病越来越引起国内外医学界特别是神经科学界的重视。缺血性脑血管病强调早期治疗,以溶栓治疗为代表,但溶栓治疗有严格的时间窗,如果超过时限再溶栓,就会导致缺血再灌注损伤的发生。在脑缺血再灌流过程中,星形胶质细胞对缺血性神经元的作用是复杂的。神经胶质酸性蛋白(glialfibril1ary acidic protein,GFAP)是星形胶质细胞(astrocyte,AST)合成的一种重要标志性蛋白,GFAP免疫反应增强说明星形胶质细胞被激活。应用大脑中动脉缺血再灌注模型,研究局灶性脑缺血再灌注对缺血脑区星形胶质细胞(AST)胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性表达及外周血中一氧化氮(NO)含量的影响。同时取百会、水沟穴,观察电针对本模型大鼠缺血脑区星形胶质细胞(AST)GFAP阳性表达、外周血中NO含量的影响,探讨早期针刺治疗抗脑缺血再灌注损伤的机制。 方法 采用SD大鼠,随机分为正常对照组,假手术组,缺血0.5h再灌注24h、48h模型组,缺血0.5h再灌注24h、48h模型组加电针组。以单尼龙线阻塞大鼠右侧大脑中动脉30分钟,然后拔掉栓子,制成大脑中动脉缺血再灌注模型(大脑中动脉线栓法制备MCAO缺血再灌注模型),神经功能障碍评分参照Zea-Longa评分标准。电针组取百会、水沟穴,采用疏密波,频率4Hz/16Hz,每次持续刺激30分钟。随相应时相,以10%水合氯醛足量麻醉大鼠(每组动物中分别取8只),4℃ 4%多聚甲醛200ml(含0.1%DEPC)心脏灌注,迅速取脑,在视交叉平面前后2mm处将脑冠状切开,留取中间部分置于4℃ 4%多聚甲醛固定液中过夜,将固定后的脑组织进行石蜡包埋。随相应时相,各只大鼠(每组动物中分别取6只)摘除眼球后取血2ml置于室温下待血液凝固后,4℃3000rpm离心10min,分离血清,-20℃保存。分别应用免疫组化SABC方法和NO硝酸还原酶法观察脑缺血再灌注及电针对大鼠缺血脑区星形胶质细胞GFAP阳性表达、外周血中NO含量湖北中医学院2002级硕士研究生毕业论文的影响。在40倍物镜下,用计算机图像分析仪(HPIAS一1 000,华中科技大学同济医学院千屏影像公司产)对各组GFAP反应阳性的星形胶质细胞计数分析;集中每只动物进行过NO反应的数据。实验结果用均数士标准差表示,所有数据均输入计算机,以SPSSll.0软件统计包处理。 结果 1.大脑中动脉栓塞和再灌注可明显损害动物的正常行为活动;给予电针处理后,可见大鼠神经体征明显改善,轻度局灶神经功能缺失者占5%;仅左前肢不能充分伸展者占30%;无行为异常者占65%;综合等级评分为0.31 17土0.1 054,与缺血再灌注组综合等级评分比较,两组间有显著性差异(P<0.01)。 2.脑缺血再灌注后缺血脑区GFAP阳性表达增强(P<0.似),并且脑缺血再灌注48h组的GFAP阳性表达弱于脑缺血再灌注24h组的GFAP阳性表达;脑缺血再灌注后外周血中NO含量增高,且模型组与正常组、假手术组比较有统计学意义(P<0 .01)0 3.电针治疗后可使脑缺血再灌注24h组缺血脑区GFAP阳性表达减弱(P<0.01)、缺血再灌注48h组缺血脑区GFAP阳性表达增强(P<0.肠);电针治疗降低脑缺血再灌注损伤大鼠外周血中N0含量(P<0.05)o 结论 脑缺血再灌注后缺血脑区星形胶质细胞活化,GFAP免疫反应阳性随再灌注时间的不同而呈动态表达。电针治疗可适当调节GFAP免疫阳性反应程度,从而发挥脑保护作用。主题词:脑缺血再灌注;星形胶质细胞;一氧化氮电针;神经胶质酸性蛋白;