蓝细菌Synechococcus sp.PCC7002中psaL和rubA基因功能的研究

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Synechococcus sp.PCC7002是一种具有光系统Ⅰ(PSⅠ)和光系统Ⅱ(PSⅡ),能够进行光合放氧作用的海洋单细胞蓝细菌。由于它生长速度快,遗传操作简便,细胞结构简单,所以一直是用于研究光合作用和代谢途径机理的理想模式生物。在高等植物和绿藻中,PSⅠ是以单体的形式存在的,而在蓝细菌中,PSⅠ以三聚体的形式发挥作用,PsaL亚基位于三聚体的中心,是三聚体形成所必需的。本论文中,我们构建了psaL基因缺失的突变体psaL-和编码PSⅡ细胞色素b-559两个亚基的基因缺失突变体psbEF,同时还构建了psaL和psbEF基因双缺失的突变体EF/L,并且检测了突变体的一系列表型。研究发现,在野生型背景下,psaL基因的缺失对菌体的正常生长没有产生影响。然而,在PSⅡ不能正确组装的psbEF突变体中,psaL基因的缺失导致菌体生长速率明显减慢,尤其是在藻胆体(PBS)吸收的绿光下该现象更为明显。EF/L突变体中PBS向PSⅠ的光能传递比psbEF突变体中少。我们分别用660nm(叶绿素吸收的光)和532nm(PBS吸收的光)的激光测定了不同光强下psaL-和EF/L突变体的P700氧化。结果显示,在PSⅠ不能形成三聚体的突变体中,P700的氧化在藻胆体吸收的光下受到了抑制。以上实验证据表明,PSⅠ三聚体对PBS向PSⅠ的光能传递具有重要作用,在PSⅡ失活的背景下,这种作用表现得更加突出,PSⅠ单体的光合作用效率更低。低温(77k)荧光发射光谱的数据还表明在psbEF和EF/L突变体中,光能可以从PSⅠ传递到PBS。  原核生物中的Rubredoxin蛋白是一种水溶性的不含血红素结构的小分子量铁硫蛋白,其中一个铁原子和四个半胱氨酸残基共价结合。在植物和蓝细菌中,rubA基因编码的Rubredoxin蛋白(RubA)除了具有原核生物中的典型结构域之外,还在C末端有一段疏水区域,推测其功能为将RubA锚定在膜上。已有的研究证据表明RubA参与了PSⅠ的组装,但对其具体机制仍不清楚。为了分析RubA蛋白在类囊体膜上的锚定方向,我们用不同的rubA基因片段与碱性磷酸酶基因进行融合并且测定了碱性磷酸酶活性。结果证明RubA蛋白的N端位于类囊体膜的基质侧。用类囊体膜进行体外P700还原实验,发现在铁氧还蛋白:NADP+氧化还原酶(FNR)存在的条件下,RubA蛋白能使P700还原加快。我们同时还证明了在FNR存在的条件下RubA蛋白可以被NADPH还原。我们在Synechococcus sp.PCC7002中构建了rubA基因缺失的突变体(rubA-)并检测了其表型。研究发现,rubA突变体由状态2向状态1的转变比野生型快,PBS将大部分光能传递给了光系统Ⅱ,即使在状态2的条件下PBS向光系统Ⅰ分配的光能也极少。根据以上结果,我们推测RubA蛋白可能参与了围绕光系统Ⅰ的循环电子传递,起到了将电子从Fd或者FNR传到Cyt b6f复合体或者质醌库的作用,并且提出了它在状态转变中发挥作用的假说。
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