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利用牛乳腺生物反应器产生乳糖分解酶从而生产低乳糖牛奶，是解决乳糖不耐症的一种手段，而构建高效、特异的表达载体是制备乳腺生物反应器的关键步骤。本实验将来源于古细菌的嗜热菌β-糖苷酶基因（LacS）根据牛的密码子使用频率进行了密码子优化，并合成了优化后的基因。以牛乳球蛋白（BLG）上游调控区域做为启动子，以嗜热菌β-糖苷酶（LacS）为目的基因，添加了Loxp锚定的新霉素抗性基因（Neo）和增强型绿色荧光蛋白报告基因(EGFP)，构建了pLOX-EGFP-BLG-LacS载体。并且通过脂质体介导方法将重组质粒转染小鼠的乳腺癌细胞，并筛选得到单克隆。阳性单克隆通过PCR进行DNA水平的整合检测；经催乳素诱导后的阳性单克隆通过RT-PCR进行mRNA水平表达检测。研究结果如下：首先,乳腺特异表达载体的构建。通过PCR技术扩增出924bp牛β-乳球蛋白（BLG）基因5′调控序列，并与T载体连接记为pMD-19BLG，质粒大小为3.7kb。然后将其与公司优化合成的pUC57-LacS质粒，pLOX-EGFP质粒通过相应的酶切后进行连接，经基因重组后构建了乳腺特异性表达载体pLOX-EGFP-BLG-LacS。使牛β-乳球蛋白基因5′端调控序列启动嗜热菌糖苷酶基因在乳腺中特异表达，而新霉素抗性基因和EGFP的表达，便于筛选阳性克隆。其次，乳腺特异性表达载体转染小鼠乳腺癌细胞。37℃水浴解冻小鼠乳腺癌细胞，并进行G418最小致死浓度测定,然后通过脂质体介导重构载体转染小鼠乳腺癌细胞，并通过PCR和RT-PCR的方法进行重构载体的整合检测和表达检测。结果表明，小鼠乳腺癌细胞G418最小致死浓度为700μg/mL, DNA水平整合检测结果表明小鼠乳腺癌细胞基因组中整合有嗜热菌糖苷酶基因，目的片段大小为1203bp；RT-PCR表达鉴定结果显示，目的片段大小与预期相同，说明BLG启动子能正确启动经密码子优化后的LacS基因在乳腺细胞中的表达。综上所述，该表达载体能够在乳腺中特异性表达，可以为核移植提供细胞来源，进行后续实验。