论文部分内容阅读
【研究背景及目的】AS的发病机制非常复杂,近年来多数学者认为本病是内膜对损伤反应的结果,血管内膜损伤是AS发生发展的始动因素。当血管受到机械损伤后,炎症反应激活、中膜平滑肌细胞(SMCs)向内膜迁移和增殖、纤维增生,最终导致新生内膜病变形成和血管重构。大量研究证实,p38促丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的持续激活在这一病理过程中发挥着重要作用。各种细胞应激通过双磷酸化p38 MAPK三肽区的苏、酪氨酸而激活该信号转导途径,从而进一步调节炎症反应及组织重构。氧化应激产物--活性氧物质(Reactive Oxygen Species,ROS)和活性氮物质(Reactive NitrogenSpecies,RNS)是导致p38 MAPK磷酸化激活的细胞刺激因子的重要组成部分。它作为“第二信使”,可通过激活p38 MAPK,介导ROS敏感基因如黏附分子VCAM-1、ICAM-1和MCP-1等单核细胞趋化因子的表达,并作用于SMCs和成纤维细胞,激活细胞内生长程序。近期研究发现,外膜炎症在AS发生中也发挥着作用。在严重的冠状动脉损伤之后,外膜成纤维细胞优先向内膜增殖和迁移;外膜套管、埋置内毒素浸泡的丝线等均可导致新生内膜形成;经皮腔内斑块旋切术、血管成形术和球囊扩张及支架植入术等腔内治疗对血管全层均有损伤,并可能激活由外膜功能障碍触发的AS形成的级联效应,导致再狭窄发生。然而,血管外膜损伤导致新生内膜形成的机制尚不清楚,p38MAPK是否也在此病理过程中被激活并发挥重要作用?在本实验中,我们通过建立家兔颈动脉外膜损伤致内膜病变模型,探讨血管外膜损伤在新生内膜形成中的作用;证实氧化应激水平升高,p38 MAPK的持续激活,是血管外膜损伤后新生内膜(neointima,NI)形成的原因之一;探讨阿托伐他汀和通心络抗AS的机制。【方法】1、雄性新西兰大白兔,体重2.5kg±0.5kg,随机分为普通饮食组(n=6)和高脂饮食组(n=12),后者术前予高脂饮食喂养4周。采用胶原酶消化+机械分离的方法建立单侧颈动脉外膜损伤模型,对侧行假手术,术后继续予原饲料喂养。普食组于术后2w,高脂组于术后4周和12周,取双侧颈动脉标本,行HE染色和油红O染色,明确损伤情况。2、72只雄性新西兰大白兔,随机分为对照组(n=24)、阿托伐他汀组(n=24)和通心络组(n=24)。高脂饮食喂养4周后,建立单侧颈动脉外膜损伤模型。分别于术后1d、7d、14d和28d取双侧颈动脉,冰冻切片荧光染色检测ROS产生水平,westernblot检测磷酸化p38 MAPK表达情况,免疫组化检测NF-rB及VCAM-1表达,明确p-p38表达部位。【结果】1、普食组外膜损伤侧血管有明显新生内膜形成,对照侧无明显病变形成。两侧内膜面积/中膜面积(IMR)为0.28±0.06 vs 0,P＜0.05,病变内无脂质沉积。高脂饮食喂养4周后,该组血脂(TC及LDL-C)较基础血脂显著升高,P＜0.05;血管外膜损伤术后4w,损伤侧血管可见明显新生内膜形成,IMR为1.56±0.14 vs 0.05±0.02(P＜0.05),12w时可形成典型AS病变,病变内有大量脂质沉积,IMR为2.02±0.18vs 0.10±0.05(P＜0.05)。2、颈动脉外膜损伤术后1d始,p-p38 MAPK表达增加并持续至少28d。ROS产生、NF-kB及VCAM-1表达与p38 MAPK的变化一致。给予HMG-CoA还原酶抑制剂阿托伐他汀后,上述指标在各时间点表达均下调(P＜0.05),其表达曲线与对照组相似。经通心络干预后,结果类似,但表达曲线与前两组稍有差异。与对照组比较,阿托伐他汀组和通心络组TC及LDL-C水平显著下降,分别为41.50±5.47 vs 14.31±2.23 vs 23.48±2.90(P＜0.05)和19.64±2.71 vs 7.90±1.63 vs 13.68±5.90(P＜0.05);与对照组比较,阿托伐他汀组和通心络组NI形成明显减少,IMR分别为1.56±0.14 vs0.41±0.06 vs 0.49±0.08(P＜0.05)。【结论】1、通过胶原酶消化+机械分离的方法可成功建立兔颈动脉外膜损伤模型,并证实血管外膜损伤可导致新生内膜形成,血管外膜损伤与AS病变形成相关;2、氧化应激水平升高,p38 MAPK的持续激活,是血管外膜损伤导致新生内膜形成的原因之一,二者在此病理过程中发挥着重要作用;3、降低氧化应激水平,抑制p38 MAPK激活可能是阿托伐他汀和通心络抗AS、减轻血管外膜损伤所致新生内膜形成的机制之一。