针对草坪草分子标记少、限制分子生物学研究和应用的问题,本研究以高羊茅、三叶草和早熟禾三种主要草坪草为对象,运用生物信息学和通用性分析等手段,分别开发了高羊茅、三叶草和早熟禾EST-SSR标记498、445和499个,并用所开发的EST-SSR标记用于相应的遗传多样性分析。主要结果如下:运用源于小麦、大麦、玉米、高粱和水稻五种作物的732对EST-SSR引物,在高羊茅、三叶草和早熟禾上进行通用性分析,406对引物在高羊茅上能有效的扩增,占总数的55.46%。354对引物在三叶草上能有效扩增,占总数的48.36%。457对引物在早熟禾上进行有效扩增,占总数的62.43%。根据EST-SSR信息分析结果,设计合成了基于高羊茅EST的108对引物,经电泳检测,92对引物在高羊茅上可扩增出稳定清晰的条带。设计合成了基于三叶草EST的93对引物,经电泳检测,91对引物在三叶草上扩增出清晰稳定的条带。从以上开发的EST-SSR引物中选取81对高羊茅EST-SSR,在12个高羊茅品种进行遗传多样性分析,79对引物表现多态性,多态性比率为97.53%,12个高羊茅品种在GS值(相似系数)为0.81水平上聚为5个大类。选取107对三叶草EST-SSR,在5个三叶草品种和红豆草、苜蓿中进行遗传多样性分析,104对引物表现多态性,多态性比率为97.20%。七份材料在相似系数为0.51水平分为两大类。选取43对早熟禾EST-SSR引物用于19个早熟禾品种的遗传多样性分析,19个早熟禾品种在相似系数为0.58水平可分为两大类。