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目的:通过“肺癌II号”中药复方对荷Lewis肺癌小鼠的实验研究,探讨该中药复方在实验研究中的疗效依据及其作用机制。为揭示“肺癌II号”中药复方在临床中治疗肺癌的疗效依据及其作用机制提供可靠的基础数据。
方法:将40只造模成功的皮下种植了Lewis肺癌细胞的C57BL/6J小鼠随机等分成生理盐水对照组、单纯化疗组、中药组、中药+化疗组,每组10只,给药12天后处死小鼠,观察小鼠体重、瘤体、脾脏、运用流式细胞仪分析小鼠肿瘤细胞增殖周期各时相分布、计算凋亡率,肿瘤组织及肝脏组织做病理切片观察其形态变化、用全自动血球计数仪检测血细胞等多个检测指标。
结果:(1)Lung Ⅱ中药复方可以阻止肿瘤细胞G1期向S期转变,使DIPG1期的细胞含量升高,降低细胞增殖指数(PI),从而能起到延缓细胞增殖,抑制肿瘤生长的作用。在此方面,Lung Ⅱ中药复方抑制肿瘤生长的疗效显著弱于环磷酰胺单用组;环磷酰胺单用组此疗效又显著弱于Lung Ⅱ中药复方组与环磷酰胺联合应用组。在阻止G1期向S期转变,使DIPG1期的细胞含量的升高,使DIPs期的细胞含量降低,降低细胞增殖指数(PI),延缓细胞增殖,从而抑制肿瘤生长方面,Lung Ⅱ中药复方和环磷酰胺有协同增效作用;Lung Ⅱ中药复方与环磷酰胺联合应用疗效最好。(2)Lung Ⅱ中药复方可以促进肿瘤细胞凋亡,使细胞的凋亡率(APOPTOSIS)升高,从而抑制肿瘤生长;但是此疗效显著弱于环磷酰胺单用组。在此方面,Lung Ⅱ中药复方和环磷酰胺无协同增效作用。(3)Lung Ⅱ中药复方和环磷酰胺对降低瘤质量、提高抑瘤率、降低瘤体积有协同增效作用。Lung Ⅱ中药复方、环磷酰胺联合应用时可以显著升高瘤密度。(4)Lung Ⅱ中药复方能够抵消环磷酰胺对脾脏的抑制、损伤作用,保持脾脏重量。Lung Ⅱ中药复方、Lung Ⅱ中药复方与环磷酰胺联合应用能显著升高脾密度。Lung Ⅱ中药复方能协助升高脾密度。(5)各肿瘤组织病理切片观察为小细胞低分化肿瘤细胞,肿瘤细胞体积小,核大,胞浆少,异型性明显,与原位瘤组织病理形态一致,说明本课题是在成功复制荷Lewis肺癌C57BL/6J小鼠动物模型的基础上开展各项研究。各组肿瘤及肝脏组织病理切片观察提示:肺癌II号可能有一定的杀伤肿瘤细胞作用并可能有增强机体免疫作用,促进组织修复作用。肺癌II号可能对肝脏组织无明显损害。环磷酰胺可能有显著的杀伤肿瘤细胞作用,但是可能显著损害肝脏组织。(6)Lung Ⅱ中药复方与环磷酰胺联合使用可以避免环磷酰胺引起的红细胞计数、血红蛋白数、红细胞压积、血小板计数过度升高,提示Lung Ⅱ中药复方有一定的避免由环磷酰胺引起的高粘血症的作用;但是,Lung Ⅱ中药复方与环磷酰胺联合使用不能明显避免环磷酰胺引起的白细胞计数、淋巴细胞计数显著降低的副作用。
结论:本课题在成功复制荷Lewis肺癌C57BL/6J小鼠动物模型的基础上开展各项研究。Lung Ⅱ中药复方具有明显的抗恶性肿瘤作用,与化疗药物环磷酰胺合用治疗效果更好。Lung Ⅱ中药复方获效的可能作用机制主要为:(1)Lung II中药复方调控肿瘤细胞G1/S位点,使肿瘤细胞阻滞于G1期,不再进入有丝分裂,并促进肿瘤细胞凋亡,从而达到抑制肿瘤的作用。在阻止G1期向S期转变,使DIPG1期的细胞含量升高,使DIPS期的细胞含量降低,降低细胞增殖指数(PI),延缓细胞增殖,从而抑制肿瘤生长方面,Lung Ⅱ中药复方和环磷酰胺有协同增效作用;Lung Ⅱ中药复方与环磷酰胺联合应用疗效最好。(2)Lung Ⅱ中药复方和环磷酰胺对降低瘤质量、提高抑瘤率、降低瘤体积、升高瘤密度有协同增效作用。Lung Ⅱ中药复方与环磷酰胺联合应用时升高瘤密度可能系降低细胞间质含量,可能抑制瘤体内毛细血管增生等。(3)Lung Ⅱ中药复方能够抵消环磷酰胺对脾脏的抑制、损伤作用,保持脾脏重量;Lung Ⅱ中药复方能够促进脾脏组织细胞增生,增加脾脏密度,从而增强其功能,增强机体免疫的作用。(4)LungII中药复方与环磷酰胺对红细胞计数、血红蛋白数、红细胞压积、血小板计数升高的升高有拮抗作用。Lung Ⅱ中药复方可以避免环磷酰胺引起的高粘血症,起到活血化瘀的作用,可以降低环磷酰胺对血液系统副作用。(5)Lung Ⅱ中药复方不会显著降低白细胞计数、淋巴细胞计数。但是,Lung Ⅱ中药复方与环磷酰胺联合使用不能明显避免环磷酰胺引起的白细胞计数、淋巴细胞计数显著降低的副作用。本研究课题探索建立起对荷Lewis肺癌小鼠采用流式细胞术等进行体内中药抗肿瘤机制的研究方法,具备实验周期短、成本低、可靠性高、指标明确、客观,重现性好的特点,荷瘤动物模型对抗肿瘤中药的反应与临床反应基本平行,为中药抗肿瘤机制研究提供了新的思路及方法。