溶菌酶高产菌株的筛选及其产酶研究

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:maybeen
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本论文系统研究了产溶菌酶菌株的分离筛选及鉴定,发酵条件的优化和粗酶液酶学性质,研究结果如下:从不同地区采集的156个土壤样品中进行筛选,最终,从河北农业大学标本园的果园土壤中筛选得到一高产菌株。通过产酶菌株的分离筛选,建立了一套快速、准确的溶菌酶高产菌株筛选方法:通过添加金黄色葡萄球菌的双层平板分离初筛,琼脂打孔法进行高抑菌活性菌株的初步筛选,验证抑菌物质的初筛方法,测定酶活力的复筛的方法;确定了合理、客观的综合考察酶活的方法。对菌株S2-6b进行鉴定,分别在光学显微镜和扫描电镜下观察了菌体形态、大小,并对其在营养琼脂平板上的单菌落形态、大小、颜色等特征进行了描述;通过一系列生理生化试验及16SrDNA保守序列的分析,将此菌株初步鉴定为溶杆菌(LysobacterS2-6b)。对溶杆菌S2-6b的发酵条件进行了研究,确定其最佳培养基成分及最佳培养条件。研究了不同碳源、氮源、无机盐、表面活性剂、不同培养温度、时间、pH值等主要因素对溶杆菌S2-6b产酶的影响,进行发酵条件优化,优化结果表明,菌株产酶优化的培养基为,可溶性淀粉1.25%,牛肉膏2.5%,玉米浆1.0%,Tween-80 0.1%;优化发酵条件为,接种量3%,发酵培养基的起始pH为7.0,装液量40/300 mL,摇床28℃,200 r/min,培养40 h。经过发酵条件优化,菌株产酶活力可达6 166.67 U/mL。酶学性质研究发现,菌株溶菌酶的基本酶学性质为:最适作用温度75℃,75℃下的半衰期为17.3 min;最适作用pH值为7.0,酶的pH稳定范围在3.0~11.0之间;其中,Mg2+,Mn2+,Cu2+,Al3+,Ca2+对溶菌酶水解底物有不同程度的抑制,酶活力分别下降了41.7%,40.8%,40.6%,16.7%,12.5%,其他金属离子对酶活力基本没有影响。SDS对溶菌酶的活性抑制明显,使酶活力下降了33.5%。EDTA使酶活力升高了17%。与鸡卵清溶菌酶相比较,S2-6b溶菌酶对受试菌株有不同程度的抑制和杀灭作用,抑菌谱比卵清溶菌酶广泛。
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