【摘 要】
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目的:探讨不同灵长类动物SAMHD1蛋白的抗病毒、抑制逆转录转座子LINE-1和减弱干扰素产生信号通路等作用,为灵长类动物SAMHD1蛋白的进一步研究提供依据。方法:构建稳定表达SAM
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目的:探讨不同灵长类动物SAMHD1蛋白的抗病毒、抑制逆转录转座子LINE-1和减弱干扰素产生信号通路等作用,为灵长类动物SAMHD1蛋白的进一步研究提供依据。方法:构建稳定表达SAMHD1蛋白的U937细胞系,以空载体构建的细胞作为空白对照组,以稳定表达不同灵长类动物SAMHD1蛋白的U937细胞系为实验组。经佛波酯刺激分化成巨噬样细胞后,采用流式细胞术分析HIV-1-GFP病毒在不同实验组中的感染率。以单独转染SAMHD1表达质粒的HEK293T细胞为对照组,共同转染SAMHD1与HIV-2/SIV Vpx表达质粒的细胞为实验组,转染后48 h收获细胞,采用蛋白印迹实验检测SAMHD1蛋白水平,免疫荧光检测方法观察不同SAMHD1蛋白的细胞内定位。以单独转染LINE-1-GFP报告质粒的HEK293T细胞作为对照组,以共同转染LINE-1-GFP与SAMHD1表达质粒的细胞为实验组,采用流式细胞术检测GFP阳性细胞率。以单独转染IFN-luc报告质粒的HEK293T细胞为对照组,共同转染IFN-luc与SAMHD1表达质粒的细胞为实验组,采用化学发光仪检测HEK293T细胞中荧光素酶的表达水平。结果:抗病毒实验中,与对照组比较,灵长类动物SAMHD1稳定表达的实验组HIV-1细胞感染率明显降低(P<0.01)。病毒蛋白Vpx降解实验中,与对照组比较,HIV-2、SIVmac和SIVdeb编码的Vpx蛋白明显降低了灵长类动物SAMHD1蛋白表达水平。免疫荧光实验,灵长类动物SAMHD1蛋白均定位于细胞核内。抑制LINE-1实验中,与对照组相比较,SAMHD1瞬时表达的实验组细胞中GFP阳性细胞率明显降低(P<0.05或P<0.01)。抑制免疫激活实验中,与对照组相比较,实验组中灵长类SAMHD1表达明显降低了IFN-luc荧光素酶水平(P<0.05)。结论:不同灵长类动物SAMHD1蛋白具有抵抗HIV-1病毒感染、抑制逆转录转座子LINE-1以及拮抗天然免疫系统产生干扰素的作用。
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