本课题以四逆汤(附子、干姜、甘草)为研究对象，采用HPLC、HPLC/MS以及HPLC/MS/MS等技术手段，在体外化学成分、体内化学成分及药动学层面，从特征图谱的整体观念，探讨甘草在四逆汤中的“甘缓”作用的物质基础变化规律，揭示甘草在四逆汤中的“甘缓”的药物化学、药动学等多环节的作用机理。　　主要研究工作如下：　　1、从体外化学成分层面探讨甘草在四逆汤中的“甘缓”作用　　建立配伍甘草前后四逆汤的特征图谱，根据甘草和附子中主要化学成分的性质，将四逆汤分为酸性组分和碱性组分两部分，分别建立HPLC检测方法，分别测定甘草水煎液、四逆汤水煎液(附子、干姜、甘草)及阴性对照水煎液(附子、干姜)中的酸性成分HPLC特征图谱，缺甘草四逆汤水煎液、四逆汤水煎液(附子、干姜、甘草)及阴性对照水煎液(甘草、干姜)中的碱性成分特征图谱，采用HPLC-UV及LC-MS法分别对两类成分在不同组方中特征图谱进行比较。　　结果表明，配伍甘草后四逆汤中特征各成分的量明显降低，乌头碱(AC)、新乌头碱(MA)等同时具有毒性及药效作用的双酯型生物碱类成分消失；苯甲酰新乌头原碱(BM)、苯甲酰乌头原碱(BA)等有效成分浓度降低；甘草中的甘草苷、甘草酸等成分也有一定程度的降低。可能是配伍甘草后，甘草中的甘草酸等成分与附子中的乌头碱等成分结合，降低了乌头碱等同时具有毒性及药效作用的生物碱类成分的浓度，使其水解速率减慢。另外采用HPLC-MS分别推测出了附子及甘草中的各11个可能的化合物。其中在附子化合物中，除了5个己知成分外，delphinine(翠雀碱)，14-anisoylaconine，aljesaconitine B均为具有毒性的成分，其含量的降低或消失也说明甘草对附子的解毒作用。本节从体外化学成分层面说明了配伍甘草对四逆汤的“甘缓”作用物质基础的变化。　　2、从体内化学成分层面探讨甘草在四逆汤中“甘缓”的作用　　建立了配伍甘草前后四逆汤大鼠血浆样品的LC/MS/MS测定方法，以乌头碱(AC)、新乌头碱(MA)、次乌头碱(HA)，苯甲酰新乌头原碱(BM)、苯甲酰乌头原碱(BA)为主要检测对象，对缺甘草四逆汤(附子、干姜)及四逆汤(附子、干姜、甘草)组中各成分在血浆中的浓度进行比较。　　结果表明，四逆汤(附子、干姜、甘草)组中，AC、MA、HA等同时具有毒性及药效作用的双酯型生物碱类成分的浓度均较在缺甘草四逆汤(附子、干姜)组低；而BM、BA等单酯型生物碱类成分在四逆汤(附子、干姜、甘草)组中的浓度较高。说明配伍甘草，可以降低AC、MA、HA等同时具有毒性及药效作用的双酯型生物碱在体内的浓度，提高BM、BA等单酯型生物碱药效成分在体内的浓度，从而起到减毒、延效的作用。本节从体内化学成分层面说明了配伍甘草对四逆汤的“甘缓”作用物质基础变化规律。　　3、从药代动力学层面探讨甘草在四逆汤中“甘缓”的作用　　通过第2部分建立的四逆汤体内样品的分析方法，检测了分别给予缺甘草四逆汤和四逆汤后大鼠的血浆样品，分析了AC、MA、HA、BM、BA等5种成分在大鼠体内的吸收情况，比较了缺甘草四逆汤组及四逆汤组大鼠血浆样品中5种成分的药时曲线、t1/2等药动学参数。　　结果表明，在缺甘草四逆汤组大鼠血浆样品中，AC、MA、HA等同时具有毒性及药效作用的双酯型生物碱的Cmax及AUC明显高于四逆汤全方组，而其t1/2比四逆汤全方组短，可能是因为配伍后甘草中的甘草酸的成分与AC等生物碱类成分结合，在体内逐步释放，减缓了其在体内的吸收，降低由于高浓度的AC、MA、HA等的快速吸收产生的毒性；而药效成分BM、BA的MRT、Cmax及AUC在四逆汤全方组则比较高，而tmax在四逆汤全方组较短，可以较好较快的发挥药效作用，且持续时间延长。即配伍甘草可以改变AC、MA、HA等同时具有毒性及药效作用的乌头类生物碱成分及BM、BA等药效成分的药动学参数，使毒性降低，药效延长，因此本节从药代动力学的层面上阐释了配伍甘草对四逆汤的“甘缓”作用物质基础变化。