论文部分内容阅读
目的:本实验建立并验证了一种新的高效液相色谱-二极管阵列检测（HPLC-DAD）法检测比格犬血浆中他达拉非浓度的方法,用于研究淫羊藿提取液对他达拉非在比格犬体内代谢的影响。方法:本实验选取6只健康比格犬,雌雄各半,体重（8±2）kg。实验采用自身对照方法,分别考察单剂量给予他达拉非（1 mg/kg）（对照组）以及连续7天口服淫羊藿提取物（0.6 g/kg）后再给予他达拉非（1 mg/kg）（实验组）的药代动力学差异。在给药后0.33,0.67,1,1.5,2,3,4,6,8,12,24,36 h于前肢内侧头静脉和后肢外侧小隐静脉采集静脉血1.0 mL,血样置于加有肝素的EP管中,混匀,10 000 r/min下离心10 min,取上清,-20℃保存待测。使用HPLC Agilent 1100色谱仪,检测器使用二极管阵列检测器。采用的色谱柱Agilent TC-C18（150 mm×4.6 mm,5μm）;流动相组成为乙腈-0.1%三氟乙酸-水（48:10:42）（V/V/V）,流速设定为1.0 mL/min;检测波长采用286 nm;柱温为30℃。卡马西平做为内标,所有采集的比格犬血浆在碱性条件下经乙酸乙酯萃取后检测,使用DAS 2.0软件的非房室模型计算药动学参数。观察淫羊藿提取物对他达拉非代谢的影响。结果:在本实验条件下他达拉非保留时间6.41 min,内标卡马西平的保留时间为5.44 min,血浆中的他达拉非浓度在1200 ng/mL范围内良好的线性关系,定量下线为1 ng/mL,他达拉非的标准曲线y=0.0067x-0.0038（r=0.999 8）;低中高三个浓度（2.5、50、150 ng/mL）的日内精密度的RSD值分别是5.67、6.43和2.32;日间精密度的RSD值分别是4.53、5.32和7.21,均小于15%,符合药代动力学指导原则中关于对生物样品分析测定方法的基本要求。低中高三个浓度（2.5、50、150 ng/mL）的的提取回收率分别是（84.23±3.21）%,（79.37±5.49）%和（82.49±2.41）%,提取回收率的RSD值均小于15%。比格犬血浆样品分别在自动进样器放置24 h、室温放置24 h、冻融三次、冰冻保存30天条件下的RSD均小于15%,结果表明他达拉非在本实验条件下均有良好的稳定性。实验组和对照组他达拉非的Cmax分别为（72.59±16.16）和（127.16±17.93）ng/mL;AUC（0-t）分别为（739.34±69.26）和（980.57±197.58）ng·h/mL;AUC（0-）∞分别为（798.63±73.89）和（1133.91±271.70）ng·h/mL;t1/2分别为（9.06±2.08）和（12.39±5.63）ng·h/mL;CLz/F分别为（1.26±0.12）和（0.94±0.29）L/h/kg。从实验结果可以看出实验组的（淫羊藿提取物）他达拉非的Cmax比对照组降低了42.91%,AUC（0-t）和AUC（0-∞）也分别减少了24.60%和29.57%,消除率也有所升高,半衰期缩短了3.33 h。他达拉菲在与淫羊藿提取物合使用后,可以使他达拉非的AUC减少,半衰期稍缩短,淫羊藿提取物可以减少他达拉非的暴露。提示淫羊藿可以诱导他达拉非的代谢。结论:1、本研究建立了一种新的HPLC-DAD检测比格犬血浆中他达拉非的方法,该方法专属性较高,分离相对完全,检测时间短;适合他达拉非和淫羊藿提取物的药代动力学和他达拉非的药物之间相互作用的研究。2、淫羊藿提取物在比格犬体内可以诱导他达拉非的代谢,减少他达拉非的血浆暴露。