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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是猪圆环病毒病(Porcine circovirus associated disease,PCVAD)的主要病原体。其中,断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)是PCVAD的一种主要的表现形式。它主要感染6周龄~18周龄的猪,临床症状为消瘦、生长迟缓、呼吸困难和腹股沟浅淋巴结肿大。在我国,PMWS于2000年首次报道,目前在全国各地广泛流行,给养猪业造成了巨大的经济损失。猪圆环病毒2型体外分离培养病毒滴度低且传代不稳定。此外,临床上PCV2常与其他病原混合感染,很难利用单纯的PCV2成功复制病例。因此,分离能在体外稳定传代培养的PCV2毒株,并利用此毒株建立一个稳定的PCV2发病模型,是PCV2致病机理研究以及基因工程疫苗评价的重要前提。本研究对多份病料组织样品进行PCV2特异性PCR检测,鉴定结果呈阳性的接种到PK-15细胞上进行病毒分离。利用间接免疫荧光试验对接种PCV2的细胞进行检测同时对PCV2分离毒株进行序列测定和分析,以确定所分离毒株为PCV2。建立荧光定量PCR方法,用于测定不同培养方法的传代毒株的拷贝数,确立适宜PCV2体外增殖的培养方式。研究结果表明:(1)通过PCR特异性检测和间接免疫荧光试验确定分离出5株PCV2毒株,并命名为311-JS01、312-JS02、FJ-JS03、119-GD01和YJ-GD02;(2)测序结果显示有3株分离株全基因长度为1766bp(311-JS01、312-JS02和FJ-JS03),2株(119-GD01和YJ-GD02)为1767bp株;(3)通过序列比对分析以及系统进化树分析,确定分离株中311-JS01、312-JS02、FJ-JS03和119-GD01属于PCV2b亚型1C分支,YJ-GD02属于PCV2b亚型1A/1B分支。5株分离株的同源性在95.7%~99.9%之间,与国内外21株参考毒株同源性在95.0%~99.0%之间,亲缘关系相近,不具备显著的地区相关性;(4)确定了适宜分离株的体外培养方式:同步接毒24 h后,用300mmol/L的D-氨基葡萄糖作用处理25min后继续培养72 h。5株PCV2毒株的成功分离为PCV2的生物学特性、致病机理、疫苗开发等研究奠定了基础。利用119-GD01株通过滴鼻和颈部肌肉注射对商品猪(ELISA抗体滴度1:100以下)进行人工感染,在攻毒前3 d、攻毒后第4、7 d用匙孔蓝蛋白(KLH)肌注和巯基乙酸腹腔注射同时进行刺激,在攻毒后第11、18 d再次腹腔注射巯基乙酸,设立阴性对照组,于攻毒后第28 d剖杀所有实验猪。攻毒试验结果表明:(1)在攻毒后2周内,免疫刺激攻毒组的体温普遍高于对照组;(2)免疫刺激攻毒组在攻毒后第7 d开始出现病毒血症,于攻毒后25 d消失,血清学阳转发生在攻毒后第18 d;(3)通过荧光定量PCR方法发现从腹股沟淋巴结、扁桃体、肺脏以及脾脏中均能检测到PCV2核酸,其中腹股沟淋巴结中病毒载量最为显著,显著高于对照组;(4)HE切片显示攻毒组的组织病理学损伤严重,而对照组则无明显变化。同时免疫组化结果也表明攻毒组各脏器分布着大量的PCV2抗原。结果表明119-GD01株成功感染了商品猪,初步建立了以体温变化、病毒血症出现、脏器中高滴度的病毒载量以及免疫组化结果呈阳性为评价标准的PCV2b感染发病模型,为PCV2b亚型致病机制以及疫苗免疫效果的评估提供了参考。