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目的(1)构建VEGFSiRNA表达载体。(2)检测RNAi在转染人舌癌细胞(TCA8113)后特异性抑制VEGF表达的作用。方法(1)合成2对含有针对VEGFmRNA序列的正反义寡核苷酸,退火后与Psilencer2.1-U6-neo载体在室温下连接,该表达载体分别被命名为Psilencer2.1-U6-neo /SiRNA 1和Psilencer2.1-U6-neo/SiRNA2。(2)阳离子聚合体介导Psilencer2.1-U6-neo/SiRNA1和Psilencer2.1-U6-neo/ SiRNA2载体及空载体转染人TCA8113细胞,经G418筛选(浓度为400mg/L )8d后,挑选细胞克隆扩大培养。同时设立正常情况下培养的TCA8113细胞为空白对照组,用免疫组化法分别检测各组TCA8113细胞内VEGF蛋白的表达,并通过MIAS-2000医用彩色病理图像免疫组化测量系统对其表达进行分析,其结果用平均灰度表示。ELISA分别检测个各组TCA8113细胞培养液内VEGF蛋白的表达。结果(1)VEGFSiRNA表达载体成功构建。(2)免疫组化结果经显微图像分析显示,空白对照组及空载体对照组灰度值分别为:122.48±5.78和124.33±5.67。Psilencer2.1-U6-neo/SiRNA1转染组和Psilencer2.1- U6-neo/SiRNA2转染组灰度值分别为:154.12±6.54和156.23±5.62。空白对照组及空载体对照组比较,表达水平无明显变化(P>0.05)。Psilencer2.1-U6-neo/SiRNAl转染组及Psilencer2.1-U6-neo/SiRNA2转染组分别与空白对照组及空载体对照组比较,表达水平明显降低(P<0.05)。(2)经ELISA检测显示,Psilencer2.1-U6-neo/SiRNAl转染组VEGF蛋白表达量为91.084±35.381,Psilencer2.1-U6-neo/SiRNA2转染组VEGF蛋白表达量为89.064±35.223而空白对照组及空载体对照组VEGF蛋白表达量分别为140.571±53.711, 135.824±49.386,空白对照组及空载体对照组比较,表达水平无明显变化(P>0.05)。Psilencer2.1-U6-neo/SiRNAl转染