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桔青霉素(CIT)是由青霉属和曲霉属的某些菌株产生的一种广泛污染玉米、大米等农作物的真菌毒素，对动物及人类具有肾毒性、致畸性等。目前已有的检测CIT的方法有薄层层析法、高效液相色谱法、ELISA检测法等。ELISA检测法灵敏度高、操作简单、适用于检测大量样品，使用较为广泛。但是在ELISA检测中需要使用CIT毒素标准品，该标准品不仅价格昂贵且会对检测人员造成身体损害。本研究以自制的抗CIT单克隆抗体为配体，采用噬菌体展示技术首次淘选到CIT的模拟表位，并建立了CIT Phage-ELISA方法。主要研究内容如下：
1、采用噬菌体随机七肽库淘选CIT的模拟表位。以抗CIT单克隆抗体为配体，采用逐轮减少抗体包被浓度，交换使用封阻液中蛋白质种类的方法，在噬菌体七肽库中淘选CFT的模拟表位，经三轮淘选后，随机挑取30个克隆，以间接ELISA确定阳性克隆，间接竞争EI+ISA确定CIT的模拟表位，结果显示其中20个克隆为CIT的模拟表位。将此20个克隆进行测序，结果获得17种序列，模拟表位的共有序列为：X-组氨酸(H)-赖氨酸(K)-X-X-X-X，缩写为XHKXXXX(X为任意氨基酸)。
2、采用噬菌体随机十二肽库淘选CFT的模拟表位。以抗CIT单克隆抗体为配体，采用逐轮减少抗体包被浓度，交换使用封阻液中蛋白质种类的方法，在噬菌体十二肽库中淘选CFT的模拟表位，经三轮淘选后，随机挑取38个克隆，以间接ELISA确定阳性克隆，间接竞争ELISA确定CIT的模拟表位，结果显示其中33个克隆为CIT的模拟表位。将此33个克隆进行测序，结果获得17种序列，模拟表位的共有序列为：X-组氨酸(H)-赖氨酸(K)-X-X-X-x，缩写为XHKXXXX(X为任意氨基酸)。
3、Phage-ELISA方法的建立。以含有CFI七肽模拟表位的噬菌体替代CIT毒素标品建立了CIT Phage-ELISA，间接竞争ELISA标准曲线的检测范围为15～325 ng/mL，检测下限为10 ng/mL，饲料样品加标回收率为80.6～102.1％，变异系数为1.0～7.4％；玉米样品加标回收率为86.4-93.4％，变异系数为1.5-7.8％；大米样品加标回收率为84.8-94.8％，变异系数为2.2-6.7％。应用于48份样品中CIT含量的检测，检测结果与传统ELISA检测方法经统计学分析无显著性差异。以含有CIT十二肽模拟表位的噬菌体替代CIT毒素标品建立了CIT Phage-ELISA，间接竞争ELISA标准曲线的检测范围为15～439 ng/mL，检测下限为10 ng/mL，饲料样品加标回收率为64.2～108.4％，变异系数为1.1～5.6％；玉米样品加标回收率为81.4-100.04％，变异系数为1.1-4.0％；大米样品中CIT加标回收率为84.1-94.4％，变异系数为2.4-5.8％。应用于48份样品中CIT含量的检测，检测结果与传统ELISA检测方法经统计学分析无显著性差异。