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胚胎源性心血管疾病是目前全球研究的前沿和热点问题,子痫前期（Preeclampsia,PE）是引起胚胎源性心血管疾病最重要的诱因之一,然而我们对其机制仍知之甚少。子痫前期是一个与母体健康和胎儿死亡有密切联系的孕期并发症,临床表现涉及多个系统,最常见的临床症状包括新发的高血压和蛋白尿。大量的流行病学调查发现,子痫前期与后代心血管和代谢性疾病发病率增加有关。外泌体是直径约为40-160nm的小囊泡,为细胞分泌而成,包裹了 DNA、RNA、蛋白质和脂质等多种生物分子。外泌体在细胞之间的信号转导以及物质交换过程中承担了重要的角色。外泌体中的微小RNA（microRNAs,miRNAs）在信号的传递中具有重要的作用。但对外泌体中microRNAs介导的对子代心血管功能的调控机制仍需系统而深入的研究。我们推测在子痫前期时,患病的胎盘释放血管相关调控因子并通过外泌体分泌经脐血递送至子代血管,通过释放相关microRNAs,诱发子代产生相应的心血管近远期效应。为此,我们对子痫前期子代脐静脉血中的外泌体microRNAs进行了深度测序分析,发现miRNA-483-5p异常高表达,推测miRNA-483-5p可能在调控子痫前期子代血管功能中具有重要作用。本研究以子痫前期患者及正常孕妇的子代脐静脉血为研究对象,检测先前筛选到的可能与子代心血管功能有关的miRNA-483-5p在其中的表达情况,然后构建miRNA-483-5p过表达人脐静脉内皮细胞株,qPCR验证转染效果,利用实时无标记细胞分析仪研究miRNA-483-5p表达量的变化对人脐静脉内皮细胞活力、增殖、迁移能力等生物学活动的影响。在此基础上,利用生物信息学软件初步预测miRNA-483-5p调控的靶基因,利用Western blot检测miRNA-483-5p过表达人脐静脉内皮细胞中靶基因的表达水平。第一部分验证miR-483-5p在脐静脉血外泌体中的异常表达目的检测子痫前期患者及正常妊娠孕妇的子代脐静脉血外泌体中miR-483-5p的表达情况。方法收集子痫前期患者及正常妊娠孕妇的子代脐静脉血样本。利用外泌体提取试剂盒提取脐静脉血中的外泌体,纳米颗粒追踪分析技术、透射电子显微镜和Western Blot实验对其进行鉴定。利用miRNA提取试剂盒提取外泌体所含miRNAs,利用qPCR技术检测子痫前期患者及正常妊娠孕妇中的脐静脉血外泌体miR-483-5p的表达情况。结果外泌体提取及鉴定结果显示,提取的外泌体在透射电子显微镜下为类圆形的囊泡;纳米颗粒追踪分析显示提取的外泌体直径大约在100 nm左右;子痫前期患者子代脐带血中提取的外泌体在Western Blot实验中外泌体标志物CD63表达阳性。miRNA的qPCR结果显示子痫前期患者脐静脉血外泌体中miRNA-483-5p的表达量明显高于正常妊娠孕妇。第二部分阐明miR-483-5p的异常表达在子代血管内皮功能紊乱中的作用目的在人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中过量表达miR-483-5p,检测内皮细胞增殖和迁移的功能变化。方法利用mimic试剂构建miR-483-5p过表达人脐静脉内皮细胞株,qPCR验证转染效果,利用实时无标记细胞分析仪研究miR-483-5p表达量的变化对人脐静脉内皮细胞活力、增殖、迁移能力等生物学活动的影响。结果通过荧光定量PCR技术验证,转染mimic试剂的人脐静脉内皮细胞中miRNA-483-5p的表达量显著高于对照组（P＜0.05）。实时无标记细胞分析仪显示,人脐静脉内皮细胞miRNA-483-5p过表达后,增殖和迁移能力明显减弱。第三部分探索miR-483-5p靶向调控蛋白目的预测miRNA-483-5p的可能靶基因并进行验证。方法利用生物信息学软件（TargetScan7.2）预测miRNA-483-5p调控的靶基因。利用Western blot技术检测miR-483-5p过表达后,人脐静脉内皮细胞中靶蛋白的表达水平。结果根据生物信息学软件（TargetScan7.2）的初步预测,G蛋白偶联受体激酶2（GRK2）是miR-483-5p的靶基因。Western blot结果显示,miR-483-5p过表达后人脐静脉内皮细胞中GRK2的表达量显著低于对照组。结论1.子痫前期患者脐静脉血外泌体中miRNA-483-5p的表达量明显高于正常妊娠孕妇。2.人脐静脉内皮细胞的miRNA-483-5p过表达后细胞的增殖和迁移能力受到抑制。3.miR-483-5p的靶基因是G蛋白偶联受体激酶2。过表达miR-483-5p抑制GRK2的表达。上述结果提示外泌体miRNA-483-5p在子痫前期子代微血管功能障碍中具有潜在的作用,miRNA-483-5p可能通过靶向调控GRK2影响子代血管功能。