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本实验室于2005年克隆了黄鳍棘鲷白细胞介素1β，并将推测的成熟肽基因序列插入原核表达载体pQE30，再转化到大肠杆菌细胞M15中，构建了原核表达系统。在此基础上，本研究继续开展黄鳍棘鲷白细胞介素1β生物学活性方面的研究。对诱导表达后的重组蛋白采用Ni2+-Chelating Sepharose FF层析技术进行了纯化，并采用梯度透析对纯化蛋白进行复性。结合对插入片段的测序结果以及Western Blot可以确定，所纯化的重组蛋白即为重组白细胞介素1β（recombinant Interleukin 1β，rIL-1β）。经过Band Scan 5.0软件分析，纯化的rIL-1β纯度达到95％。纯化蛋白经过离心超滤浓缩后，Bradford法测定其浓度为0.18mg／ml；经鲎试剂检测，纯化蛋白的内毒素含量小于0.964EU／ml。采用Percoll不连续密度梯度离心分离黄鳍棘鲷头肾白细胞，实验证明，在分离液密度1.080g／ml的界面上富集的细胞中，白细胞超过95％。将制备的头肾白细胞进行原代细胞培养，并用rIL-1β刺激培养的细胞，23℃培养4h后提取细胞的总RNA，用RT-PCR方法检测到，当培养基中rIL-1β的浓度达到20ng／ml时可以有效提高IL-1β基因的转录水平，与5μg／ml LPS的刺激效果相当。本研究还分别采用Sepharose-6B凝胶过滤层析、Phenyl Sepharose FF疏水作用层析和rProtein A Sepharose亲和层析技术纯化黄鳍棘鲷血清IgM，并对这三种层析纯化方法进行了比较。纯化产物进行SDS-PAGE，电泳结果扫描后经Band Scan5.0软件分析显示：单独使用Sepharose-6B凝胶过滤层析或Phenyl Sepharose FF疏水作用层析得到的IgM纯度只有56％；两者联合使用可以达到69％，而rProtein A Sepharose亲和层析一步就可以达到89％的纯度；纯化得到的黄鳍棘鲷血清IgM的重链和轻链分子量分别为73.6KDa和26.5KDa。以rProtein A Sepharose亲和层析纯化的黄鳍棘鲷血清IgM为抗原，制备其兔的抗血清，经过间接ELISA检测，效价达到1：25600，为进一步开展rIL-1β的免疫佐剂功能的研究奠定了基础。