【摘 要】
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目的:牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis）,是公认的慢性牙周炎主要致病菌。课题组前期研究发现,在P.gingivalis感染epi-4细胞过程中自噬增强、富含脯氨酸的酪氨酸激酶2（protein-rich tyrosine kinase 2,Pyk2）活化,并且利用Pyk2特异性抑制剂TAE226处理后,自噬水平明显下降,提示Pyk2介导P.gingivalis感染诱
【基金项目】
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国家自然科学基金（No.81300886）； 辽宁省自然科学基金（No.20180551232）； 沈阳市中青年科技创新人才支持计划（No.RC170078）； 沈阳市科技计划（No.F16-102-4-00）；
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目的:牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis）,是公认的慢性牙周炎主要致病菌。课题组前期研究发现,在P.gingivalis感染epi-4细胞过程中自噬增强、富含脯氨酸的酪氨酸激酶2（protein-rich tyrosine kinase 2,Pyk2）活化,并且利用Pyk2特异性抑制剂TAE226处理后,自噬水平明显下降,提示Pyk2介导P.gingivalis感染诱发的epi-4细胞自噬。有学者发现miRNA-335-5p通过增强自噬可以减轻小鼠炎症模型中内皮细胞的炎症程度。本研究构建高/低表达miRNA-335-5p的牙龈上皮细胞,通过对P.gingivalis感染牙龈上皮细胞过程中LC3及Pyk2表达的研究,旨在揭示该菌的致病机理,为慢性牙周炎的防治提供新的靶点和思路。研究方法:1、P.gingivalis感染epi-4细胞（MOI 100:1）0、1、2、4、6、12 h后,以未感染P.gingivalis组为对照组,采用加尾法定量PCR检测miRNA-335-5p的表达情况。2、利用脂质体瞬时转染技术,将miRNA-335-5p mimic、inhibitor及其阴性对照物分别转染至epi-4细胞,转染后通过流式细胞术、加尾法定量PCR检测转染效率。3、实时定量PCR检测LC3、Pyk2 m RNA表达情况;Western blot检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Pyk2蛋白质水平。4、利用miRWalk软件预测miRNA-335-5p的靶基因;利用GTRD软件预测同时与LC3、Pyk2启动子区域结合的转录因子;将二者结果求取交集后结合文献选择具有负向调节作用的转录因子。结果:1、P.gingivalis感染epi-4细胞后,miRNA-335-5p表达升高,在1 h达到峰值,是对照组的6.8倍（P＜0.001）;2、流式细胞术检测mi NAR-335-5p mimic的转染效率为73.1%,inhibitor的转染效率为71%;加尾法定量PCR显示,mimic组miRNA-335-5p表达升高,是NC组的456倍,inhibitor组miRNA-335-5p表达下降,是NC-in组的0.42倍（P＜0.05）;3、mimic预处理后,与NC组相比,LC3、Pyk2 m RNA表达量升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Pyk2蛋白质表达增加;inhibitor预处理后,与NC-in组相比,LC3、Pyk2 m RNA表达量下降,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Pyk2蛋白质表达降低（P＜0.05）;4、miRWalk软件与GTRD软件预测结果求取交集后得到四种转录因子,分别是FOXA2、WT1、SP1、MAX,其中SP1具有负向调节作用。结论:P.gingivalis感染可上调epi-4细胞中miRNA-335-5p的表达,miRNA-335-5p的表达可促进Pyk2介导的epi-4细胞自噬。
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目的:使用PET/MR一体机评估18F-氟脱氧葡萄糖正电子发射断层扫描(18F-FDG PET)和体内不相干运动磁共振成像（MR-IVIM）参数的联合预测值在预测局部进展期宫颈癌患者肿瘤复发上的价值。资料和方法:计划进行联合放化疗的51例局部进展期宫颈癌患者在两个时间点分别进行盆腔PET/MR-IVIM和单独的MR-IVIM扫描,两个时间点分别为治疗前（Pre-）和治疗开始后第四周末（Mid-）。
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