锯缘青蟹类呼肠孤病毒的宿主范围及其对温度和消毒剂的敏感性

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近几十年来养殖业的发展迅速,而蟹类养殖技术和对疾病的研究却相对滞后,造成蟹类暴发病流行而无法控制的现象。本实验室于2004年11月珠海锯缘青蟹暴发病时采样,发现了一种类呼肠孤病毒,该病毒是导致蟹类暴发病流行的主要病毒。对该病毒进一步的研究,以便指导蟹类的健康养殖。本文对该病毒主要进行如下三个方面的研究:用人工感染和RT—PCR检测技术对自然海区常见生物种及其锯缘青蟹养殖池周围相关的生物进行调查,确定病毒的宿主范围和敏感宿主。通过人工感染的方法,用RT一PCR方法检测证实凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)、日本囊对虾(MarsupenaeusJaponicus)、脊尾白虾(Palaemoncarincauda)、罗氏沼虾(Macrobrachiumrosenbergii)、克氏螯虾(Procambiusclarkii)、日本蟳(Charybdisjaponica)、河口溪蟹(P.hokuoense)、中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)不是该病毒的自然宿主,直额绒螯蟹(Eriocheirrecta)是该病毒的自然宿主,但不能确定是否为敏感宿主。养殖池内的浮游植物、浮游动物、脊尾白虾(Palaemoncarincauda)、弹涂鱼(Periophthalmuscantonensis)、鰕虎鱼(Acentrogobius),养殖池周围的野生蟹—螃蜞(Sesarmasp.)、日本蟳(Charybdisjaponica),养殖过程中常用的饵料—白鹇(Lophuranycthemera),天然海区中常见的生物种—三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)、口虾姑(Oratosquillaoratoria)、翡翠贻贝(Mytilussmaragdinuschemnitz)、牡蛎(Ostrea)、红树蚬(Geloinacoaxans),通过RT—PCR检测其携带类呼肠孤病毒的情况,结果显示,所采集的样品都没有检测到携带该病毒。通过对类呼肠孤病毒进行不同温度处理后注射感染锯缘青蟹,结果显示,该类呼肠孤病毒在40℃、50℃、60℃温浴半小时后病毒都没有完全失活,但感染活性随着处理温度的升高而降低,青蟹的死亡高峰期都有推迟,70℃温浴30min后感染活性降低了约20%,只有在80℃温浴30min后该病毒才完全失活;在4℃至少可以保存6个月,其感染活性基本没有影响。通过不同浓度的甲醛、高锰酸钾、次氯酸钠、碘对新呼肠孤病毒进行处理后,对锯缘青蟹进行浸泡感染,结果表明,甲醛在浓度为100ppm、20ppm时,对该类呼肠孤病毒都没有显著的灭活作用;高锰酸钾在浓度为125ppm时,能够使该病毒的敏感性降低约10%,而在浓度为25ppm时,对病毒感染性没有影响;次氯酸钠在浓度为75ppm、15ppm时,对该类呼肠孤病毒都没有显著的灭活效果;碘在浓度为5ppm和25ppm时都能使青蟹的存活率提高20%,但只有在25ppm时能降低其PCR检测的阳性率。
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