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兔出血症（Rabbit hemorrhagic disease，RHD）是一种由兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagicdisease virus，RHDV）引起的急性、高度传染性、高死亡率的疾病。RHDV主要感染成年兔的肝脏、肺脏、脾脏等器官。RHDV属于杯状病毒科，其主要的结构蛋白衣壳蛋白VP60是病毒的免疫保护性抗原，在诱导宿主免疫反应中起着重要的作用。研究兔肝脏中与VP60相互作用的蛋白对阐明RHDV致病机制及兔出血症的防控具有重要意义。免疫球蛋白（Immunoglobulin）是一种具有抗体活性的球蛋白，在动物机体抵抗细菌、病毒感染过程中发挥着重要的作用。免疫球蛋白由两条重链和两条轻链组成，哺乳动物的免疫系统中存在两种不同类型的轻链kappa和lambda。本研究室使用酵母双杂交技术和表达克隆技术分别筛选与VP60相互作用的蛋白，提示兔免疫球蛋白轻链kappa（Kappa）与RHDV VP60可能存在相互作用。研究发现免疫球蛋白轻链有助于抗原抗体结合，能够促进B淋巴细胞受体的表达和抗体的分泌，广泛参与免疫调节。已经证实免疫球蛋白轻链能够结合肥大细胞，非特异性的轻链能够直接抑制病毒复制，与人羊膜或病毒粒子发生相互作用。本研究从成年兔肝脏组织提取总RNA,反转录成cDNA，使用特异性引物进行PCR扩增，获得长度为480bp的Kappa基因，构建Kappa原核表达载体pET-32a-Kappa和真核表达载体pEGFP-N1-Kappa。将重组质粒pET-32a-Kappa转化E. coli BL21(DE3) Plyss感受态细胞，通过IPTG诱导表达、纯化、复性获得Kappa蛋白。利用GST-pulldown试验和ELISA试验证明Kappa蛋白与VP60存在相互作用，将重组质粒pEGFP-N1-Kappa与pcDNA3.1-VP60共转染HEK293细胞，使用激光共聚焦技术分析Kappa蛋白与VP60蛋白在细胞内的共定位情况，结果表明Kappa蛋白与VP60蛋白共定位于细胞浆中。血凝抑制试验表明0.413μg Kappa蛋白即可抑制8个血凝单位RHDV的血凝活性，分别取106.1μg、212.2μg、424.4μg、848.8μg Kappa蛋白与2048个血凝单位的RHDV孵育后进行动物感染实验，结果显示各实验组成年兔在接种孵育产物120h小时后均有一只成年兔存活，而阳性对照组成年兔在96h内全部死亡，随着Kappa蛋白含量依次升高，成年兔死亡时间延长，说明Kappa蛋白能够延缓RHDV感染成年兔的死亡时间，具有中和RHDV感染成年兔的能力。实时荧光定量PCR检测兔肝脏和肺脏组织的RHDV病毒载量，实验组肝脏和肺脏组织病毒载量均低于阳性对照组，肝脏组织病毒载量随死亡时间延长呈显著降低趋势，肺脏组织病毒载量随死亡时间延长降低趋势不显著；Kappa蛋白高含量组肝脏和肺脏组织病毒载量随死亡时间延长显著降低。表明高含量的Kappa蛋白对RHDV感染成年兔肝脏和肺脏组织病毒的复制水平有影响。本研究成功表达Kappa基因，通过GST-pulldown试验、ELISA试验和激光共聚焦技术证明Kappa蛋白与VP60存在相互作用，利用血凝抑制实验和动物感染实验证明Kappa蛋白与RHDV的相互作用，Kappa蛋白能够延缓RHDV感染成年兔的死亡时间，具有中和RHDV感染成年兔的能力，对RHDV感染成年兔肝脏和肺脏组织病毒的复制水平有影响,为进一步研究Kappa蛋白在RHDV感染中的作用奠定了基础。