论文部分内容阅读
目的:研究小半夏加茯苓汤(Xiao Ban Xia Plus Fuling Decoction，XBFD)对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用，并通过血清学和肿瘤细胞凋亡相关分子表达水平的检测，探讨XBFD抗肿瘤的分子机制及其诱导细胞凋亡的途径，为XBFD在临床抗肿瘤应用提供理论和实验依据。 方法:建立体内H22荷瘤小鼠模型，随机分为荷瘤模型组，XBFD高剂量组，XBFD中剂量组，XBFD低剂量组，顺铂组，每组30只。接种次日开始给药，荷瘤模型组给予生理盐水10 g·kg-1，日一次;XBFD高、中、低剂量组，分别给予XBFD4g、2g、1g生药·mL-1水煎剂40、20、10 g·kg-1，日一次;顺铂组5 mg·kg-1腹腔注射0.9％氯化钠溶液稀释顺铂，分别于第1、4、7、10日各给药1次，观察小鼠生存状态及死亡情况等，实验第11日称重眼球取血后处死小鼠，取瘤体。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清，逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、苏木精-伊红(HE)染色、原位末端凋亡法(TUNEL)和免疫组化(IHC)检测肿瘤组织。 结果:(1)XBFD各剂量组给药后体重均增高，瘤重随剂量增大而降低，提示XBFD有明显的抑瘤效果。 (2) ELISA结果显示:与荷瘤模型组比较，XBFD中剂量组、顺铂组血清中的TNF-α的含量有明显的增加，XBFD高剂量组血清中的IL-2的含量有明显的增加。 (3) RT-PCR结果表明:与荷瘤模型组比较，XBFD各剂量组颗粒酶A表达升高，但无显著性差异;XBFD高、中剂量组颗粒酶B表达升高(p＜0.05); XBFD高、中剂量组穿孔素表达升高，促进颗粒酶/穿孔素途径非自愿性细胞凋亡。 (4) HE染色结果显示:建立的模型是成功的。 (5) TUNEL结果表明:XBFD能够增加H22细胞凋亡数量，且随药物剂量的增大凋亡率升高。 (6) IHC结果表明:XBFD各剂量药组颗粒酶A、颗粒酶B与穿孔素表达均较荷瘤模型组显著升高(p＜001），而且Bcl-2蛋白表达量随药物剂量增大呈下降趋势，Bax蛋白表达量随药物剂量增大呈上升趋势，调整Bcl-2/Bax比值。 结论:XBFD具有增强机体免疫功能，改善生存质量，抑制H22肝癌细胞增殖的作用，其诱导凋亡途径与颗粒酶/穿孔素参与的“非自愿细胞凋亡”及其增强Bax蛋白表达水平，降低Bcl-2蛋白表达水平有关，并且反映出XBFD对H22荷瘤小鼠的抑制作用有一定的量效关系。 抑瘤作用可能与以下机制有关: 1.提高TNF-α，IL-2的表达，从而激活T细胞活性和B细胞增殖，介导CTL发挥细胞毒作用。 2.提高穿孔素，颗粒酶的表达，从而促进穿孔素在细胞膜上形成孔道，颗粒酶大量进入细胞核激活自溶性核酸内切酶系统，使靶细胞DNA断裂，产生肿瘤细胞溶解和凋亡，诱导“非自愿细胞凋亡”。 3.通过增强Bax蛋白表达，降低Bcl-2蛋白表达，调整Bax/Bcl-2比值，促进H22细胞的调亡。