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研究目的:基于本课题研究发现了伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)中多种miRNA(Micro RNA)表达上调或者下调,miRNA在细胞增殖、分化和凋亡中的作用及miR-155在肿瘤中的关键作用,对Burkitt淋巴瘤中miR-155的表达量进行了检测,并通过抑制和过表达miR-155检测对细胞增殖及细胞蛋白的影响,为进一步研究miRNA和miR-155在Burkitt淋巴瘤中作用提供研究基础。研究方法:通过对Burkitt淋巴瘤EBV(Epstein-Barr virus)阳性细胞(EBV+Raji)和EBV阴性细胞(EBV-Ramous)进行细胞培养后,运用Sybgreen法荧光定量PCR检测细胞中miR-155的表达量。运用Lipofectamine2000脂质体法将miR-155-inhibitor(miR-155-inhibitor序列与成熟miR-155互补,是经过化学修饰的单链分子,选择性抑制miR-155的功能)和其阴性对照序列分别转染EBV+Raji细胞,即miR-155-inhibitor(Raji-in)、Raji-阴(Raji-CON)。miR-155-mimics(miR-155-mimics序列是根据成熟的miR-155设计的双链分子,模拟体内miR-155的高表达状态)和其阴性对照序列分别传染EBV-Ramous,即miR-155-mimics(Ramous-mi)、Ramous-阴(Ramous-CON)。继续运用Sybgreen法荧光定量PCR检测转染后各组细胞中miR-155的表达量。运用Western Blot方法检测转染后各组细胞中LMP1(Latent membrane protein1)的表达。运用CCK8方法检测转染后各组细胞的增殖率。运用SPSS24.0统计分析软件分析实验数据,“平均值±标准差”用于表示计量资料,t检验用于两组间均数的比较,P<0.05为差异具有统计学意义。研究结果:通过EBV+Raji细胞和EBV-Ramous细胞培养后,运用Sybgreen法荧光定量PCR检测细胞miR-155的表达量,miR-155在EBV+Raji细胞中相对表达量为:5.78±4.15,在EBV-Ramous细胞中的相对表达量为:0.24±0.14,miR-155在EBV+Raji细胞中高表达,miR-155在EBV-Ramous细胞中低表达,EBV+Raji细胞比EBV-Ramous细胞表达显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。运用Sybgreen法荧光定量PCR检测转染后4组细胞中miR-155的表达量,miR-155在miR-155-inhibitor(Raji-in)细胞中的相对表达量为:23.47±1.54;miR-155在Raji-阴(Raji-CON)细胞中的相对表达量为:28.25±0.43;miR-155在miR-155-mimics(Ramous-mi)细胞中的相对表达量为:9461.62±376.98;miR-155在Ramous-阴(Ramous-CON)细胞中的相对表达量为:158.34±14.48。miR-155在Raji-in的表达量低于Raji-CON,在Ramous-mi中的表达量高于Ramous-CON,差异具有统计学意义(P<0.05)。运用Western Blot方法检测转染后细胞中LMP1的表达,LMP1在Raji-in细胞中的表达量为:0.19±0.12,在Raji-CON细胞中的表达量为:0.37±0.13,在Raji-裸(未转染组)细胞中的表达量为:0.86±0.16。LMP1在Raji-in细胞中的表达量明显低于Raji-裸(未转染组),差异具有统计学意义(P<0.05)。运用CCK8检测转染后4组细胞0小时、24小时、48小时、72小时增殖率:Raji-in组细胞分别为:99.32±4.97、92.17±3.32、77.39±3.50、90.16±4.29;Raji-CON组细胞分别为:99.76±6.84、97.43±2.33、62.72±2.14、81.84±3.75;Ramous-mi组细胞分别为:98.94±1.20、78.86±5.08、68.97±6.80、88.55±4.21;Ramous-CON组细胞分别为:97.73±1.92、92.88±2.91、60.29±3.03、81.21±6.40。24h时,Raji-in组细胞增殖率高于Ramous-mi组细胞,Ramous-mi组细胞增殖率低于Ramous-CON组细胞。48h时,Raji-in组细胞增殖率高于Raji-CON组细胞和Ramous-mi组细胞。Ramous-mi组细胞增殖率高于Ramous-CON组细胞增殖率,差异具有统计学意义(P<0.05)。转染后4组细胞0小时、24小时、48小时、72小时抑制率:Raji-in组细胞分别为:0.68±4.97、7.83±3.32、22.61±3.50、9.84±4.29;Raji-CON组细胞分别为:0.24±6.84、2.57±2.33、37.28±2.14、18.16±3.75;Ramous-mi组细胞分别为:1.06±1.20、21.14 ±5.08、31.03±6.80、11.45±4.21;Ramous-CON组细胞分别为:2.67±1.92、7.12±2.91、39.71±3.03、18.79±6.40。24h时,Raji-in组细胞抑制率低于Ramous-mi组细胞,Ramous-mi组细胞抑制率高于Ramous-CON组细胞,呈现出显著性差异(P<0.05)。48h时,Raji-in组细胞抑制率低于Raji-CON组和Ramous-mi组细胞,Ramous-mi组细胞抑制率低于Ramous-CON组细胞,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-155与许多人类的肿瘤关系密切,是B细胞恶性肿瘤中研究最广泛的miRNA之一,有可能成为未来新的治疗靶点。本论文通过Burkitt淋巴瘤细胞的培养,Sybgreen法荧光定量PCR检测,miR-155在EBV+Raji中明显高表达,明显高于EBV-Ramous细胞(P<0.05)。Western Blot方法检测LMP1在Raji-in细胞中的表达量明显低于Raji-CON细胞和Raji-裸细胞(未转染组)(P<0.05),表明抑制miR-155在EBV+Raji细胞中表达会抑制细胞LMP1的表达。CCK8方法检测miR-155的抑制和过表达各组细胞的增殖率,24h时,Raji-in组细胞增殖率高于Ramous-mi组细胞,Ramous-mi组细胞增殖率低于Ramous-CON组细胞(P<0.05),Raji-in组细胞抑制率低于Ramous-mi组细胞,Ramous-mi组细胞抑制率高于Ramous-CON组细胞(P<0.05)。表明促进miR-155的表达在24小时EBV-Ramous细胞中抑制细胞的增殖。48h时,Raji-in组细胞增殖率高于Raji-CON组细胞和Ramous-mi组细胞,Ramous-mi组细胞增殖率高于Ramous-CON组细胞增殖率(P<0.05),Raji-in组细胞抑制率低于Raji-CON组和Ramous-mi组细胞,Ramous-mi组细胞抑制率低于Ramous-CON组细胞(P<0.05),表明抑制miR-155的表达在48小时EBV+Raji细胞中促进细胞的增殖。这些研究为进一步研究miR-155在淋巴瘤细胞中的作用进一步提供了数据基础。