博落回茎叶提取物工艺研究

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本文首先以博落回茎叶为原料,对其中4种生物碱的检测方法进行方法学考察,检测不同产地原料中4种生物碱的含量,并对其差异进行分析,建立了博落回茎叶特征图谱。其次对比酸水渗漉法和酸醇回流法在提取博落回茎叶中的血根碱的效率,通过正交试验、响应面优化试验确定了两种提取方式的最佳提取条件。接着使用不同产地原料对两种提取方式稳定性加以验证,然后通过碱沉试验,得到博落回茎叶提取物。最后还对血根碱的稳定性进行了考察,并利用HPLC及HPLC-Q/TOF-MS技术对血根碱在不同pH环境下的结构形态进行探索,分析推断其可能存在的结构形式。得到以下结果:1.确定了博落回茎叶中4种生物碱的HPLC检测方法,并对其进行了方法学考察。结果表明:该分析方法的精密度、稳定性、样品制备方法及重现性都表现良好。其次对10个不同产地的博落回茎叶中4种生物碱含量进行检测,发现不同地理环境对博落回茎叶中的4中生物碱含量影响明显。接着利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对该10个不同产地的博落回茎叶HPLC色谱图进行详细比较分析,建立了博落回茎叶特征图谱。最后将各产地的博落回的茎叶HPLC色谱图与对照色谱图进行相似度评价,结果显示:大部分产地的原料与对照图谱的相似度在90%以上,可用于博落回茎叶的品质鉴定,为选择博落回种植区域提供参考。2.对比了酸水渗漉法和酸醇回流法提取博落回茎叶中的血根碱的效率。首先对两种提取方式进行单因素试验,选定区间范围。然后分别对酸水渗漉提取、酸醇回流提取进行正交试验设计和响应面优化试验设计。试验结果得出,酸水渗漉提取的最佳提取工艺为:以1%硫酸为渗漉液,浸泡时间30 min,溶剂用量30倍,渗漉速度0.5 m L·min-1。在此条件下进行的验证试验,血根碱转移率为83.63±2.09%(n=5,RSD=2.49%);酸醇回流提取的最佳提取工艺为:乙醇体积分数90%,液固比30:1 mL·g-1,硫酸浓度0.12%,提取温度80°C,提取时间2 h,在此条件下血根碱的平均转移率可达89.36±0.49%(n=5,RSD=0.54%)。接着,使用不同产地原料对两种提取方法加以验证,结果表明两种方法对不同产地的原料的提取效果都比较稳定。采用血根碱含量最高的河南洛阳原料对两种提取方式进行后续碱沉试验,将酸水渗漉液经过碱沉、过滤和干燥,最终得到的博落回提取物中的血根碱的含量为2.25±0.11%(n=5,RSD=4.88%),平均收率为21.64±0.78%(n=5,RSD=3.61%),血根碱平均转移率为75.06±1.87%(n=5,RSD=2.49%)。将酸醇提取液经过回收溶剂、复溶、过滤、碱沉、过滤、干燥等一系列工艺流程,最终得到的博落回提取物中的血根碱的含量为1.65±0.06%(n=5,RSD=3.36%),收率为24.27±0.92%(n=5,RSD=3.77%),血根碱转移率为61.82±1.58%(n=5,RSD=2.56%)。由结果可以看出,用酸水渗漉法提取博落回茎叶中的血根碱操作步骤少,血根碱损失量低,得到的博落回提取物中血根碱的含量高,生产成本更低,更适于工业生产中的应用要求。3.通过对血根碱在不同温度、光照、pH环境中的稳定性进行考察,发现血根碱在盐酸水溶液、盐酸甲醇溶液、博落回茎叶渗漉液以及酸性乙醇博落回茎叶提取液中,热稳定性与光照稳定性表现良好。血根碱在酸性条件下保持稳定,调节pH值至中性或碱性时,溶液颜色发生改变,或出现白色絮状沉淀物。在不同pH环境中血根碱的表现很不稳定。接着对不同pH环境中的血根碱用对应pH的流动相进行全波长检测,以最大吸收波长为依据推断血根碱的结构形态,利用HPLC-Q/TOF-MS技术对不同pH环境中的血根碱的结构进行检测判断。推断结果为:在液相色谱中,随着流动相体系的改变,血根碱可能会以三种结构形式存在:λmax=274 nm的血根碱,λmax=278 nm的6-甲氧基二氢血根碱与λmax=286 nm的6-羟基二氢血根碱。但在质谱条件检测下,仅搜索到了血根碱与6-甲氧基二氢血根碱。且6-甲氧基二氢血根碱含量非常低,可能6-羟基二氢血根碱与6-甲氧基二氢血根碱键位非常不稳定,在一级质谱检测时就已基本转变回血根碱。在普通质谱检测条件下考察血根碱在不同环境中的结构形态比较困难,未来可以考虑使用核磁共振或其他技术对其进行更深入的研究。
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