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目的:鉴定大鼠海马肝敏感神经元,并探究其神经传导通路,为肝功能神经调节机制的深入研究提供实验依据。
方法:实验分为两个部分,首先神经电生理实验,选取SPF级成年健康SD(Sprague-Dawley)大鼠,参考大鼠脑立体定位图谱,利用脑立体定位仪,在大鼠左侧海马区上方开颅窗,用镀金钨丝电极胞外记录海马神经元放电,螺钉固定于颅骨上连接银丝引导接地,自制迷走神经电刺激器刺激迷走神经肝支,通过生物机能数据采集处理系统,观察并记录海马神经元在刺激前后放电频率和幅度的变化,鉴定海马肝敏感神经元。其次荧光金(FG)逆行追踪实验,将不同剂量的FG注入海马肝敏感神经元及相关脑区,对照组注射生理盐水,大鼠存活72h后,心脏灌注PBS和多聚甲醛,取脑,于多聚甲醛中固定24h,梯度蔗糖脱水至完全沉底,避光行冰冻切片,漂浮贴片,荧光显微镜观察。
结果:(1)与基础放电频率为124.31±16.31Hz,波幅90.77±14.23μV比较,30只大鼠中有26只在电刺激迷走神经肝支之后,在海马CA3区(AP:-4.9mm,ML:-5.1mm,DV:-5.0mm)可见神经放电频率和幅度明显增加,当刺激强度为3V时神经元放电频率为157.81±16.94Hz,波幅为180.81±10.50μV,6V时频率为187.77±10.66Hz,波幅为264.88±10.94μV,刺激强度为9V时频率为193.31±13.08Hz,波幅为265.23±12.91μV。采用3V、6V和9V的强度刺激迷走神经肝支时,与刺激前海马基础神经放电相比,海马CA3区(AP:-4.9mm,ML:-5.1mm,DV:-5.0mm)神经元放电频率和幅度均有显著增加(P<0.001)。刺激后恢复至刺激前放电状态的时间也随着刺激强度的增加而增长。(2)将不同剂量荧光金注射至左侧海马肝敏感神经元,在对侧海马、同侧梨形皮质(PC)、蓝斑(LC)和双侧下丘脑外侧区(LHA)处均可见神经元胞体和轴突清晰的亮白色荧光标记细胞,且标记细胞数量随注射剂量的增加而增加,提示海马肝敏感神经元可能发出纤维到同侧PC、LC和LHA,在LHA处可见双侧投射,且同侧LHA荧光强于对侧,说明同侧投射强于对侧。将荧光金注入左侧LHA、PC和LC,在左侧侧海马CA3区(AP:-4.9mm,ML:-5.1mm,DV:-5.0mm)均未见荧光标记细胞,对照组均未见荧光标记细胞。
结论:大鼠海马CA3区可能存在肝敏感神经元,其在肝脏等器官功能调节中可能具有重要作用,海马CA3区肝敏感神经元对肝脏等器官功能的作用可能与下丘脑外侧区、梨形皮质和蓝斑有关。
方法:实验分为两个部分,首先神经电生理实验,选取SPF级成年健康SD(Sprague-Dawley)大鼠,参考大鼠脑立体定位图谱,利用脑立体定位仪,在大鼠左侧海马区上方开颅窗,用镀金钨丝电极胞外记录海马神经元放电,螺钉固定于颅骨上连接银丝引导接地,自制迷走神经电刺激器刺激迷走神经肝支,通过生物机能数据采集处理系统,观察并记录海马神经元在刺激前后放电频率和幅度的变化,鉴定海马肝敏感神经元。其次荧光金(FG)逆行追踪实验,将不同剂量的FG注入海马肝敏感神经元及相关脑区,对照组注射生理盐水,大鼠存活72h后,心脏灌注PBS和多聚甲醛,取脑,于多聚甲醛中固定24h,梯度蔗糖脱水至完全沉底,避光行冰冻切片,漂浮贴片,荧光显微镜观察。
结果:(1)与基础放电频率为124.31±16.31Hz,波幅90.77±14.23μV比较,30只大鼠中有26只在电刺激迷走神经肝支之后,在海马CA3区(AP:-4.9mm,ML:-5.1mm,DV:-5.0mm)可见神经放电频率和幅度明显增加,当刺激强度为3V时神经元放电频率为157.81±16.94Hz,波幅为180.81±10.50μV,6V时频率为187.77±10.66Hz,波幅为264.88±10.94μV,刺激强度为9V时频率为193.31±13.08Hz,波幅为265.23±12.91μV。采用3V、6V和9V的强度刺激迷走神经肝支时,与刺激前海马基础神经放电相比,海马CA3区(AP:-4.9mm,ML:-5.1mm,DV:-5.0mm)神经元放电频率和幅度均有显著增加(P<0.001)。刺激后恢复至刺激前放电状态的时间也随着刺激强度的增加而增长。(2)将不同剂量荧光金注射至左侧海马肝敏感神经元,在对侧海马、同侧梨形皮质(PC)、蓝斑(LC)和双侧下丘脑外侧区(LHA)处均可见神经元胞体和轴突清晰的亮白色荧光标记细胞,且标记细胞数量随注射剂量的增加而增加,提示海马肝敏感神经元可能发出纤维到同侧PC、LC和LHA,在LHA处可见双侧投射,且同侧LHA荧光强于对侧,说明同侧投射强于对侧。将荧光金注入左侧LHA、PC和LC,在左侧侧海马CA3区(AP:-4.9mm,ML:-5.1mm,DV:-5.0mm)均未见荧光标记细胞,对照组均未见荧光标记细胞。
结论:大鼠海马CA3区可能存在肝敏感神经元,其在肝脏等器官功能调节中可能具有重要作用,海马CA3区肝敏感神经元对肝脏等器官功能的作用可能与下丘脑外侧区、梨形皮质和蓝斑有关。