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目的：利用RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术，构建针对IKKα/β基因的短发夹环状小干扰RNA(short hairpin RNA，shRNA)真核表达载体，并将重组载体pGPU6/GFP/Neo-IKKβ-shRNA2稳定转染到人脐静脉内皮细胞(HumanUmbilical Vein Endothelial Cells，HUVECs)并进行表达，建立稳定低表达IKKβ内皮细胞系，为进一步研究IKKα/β基因功能与血管内皮胰岛素抵抗相互关系奠定基础。
方法：利用GenBank数据库检索IKKα、IKKβ基因的核苷酸序列，根据shRNA设计原则，各自设计并合成4段特异性的小干扰片段，将其定向克隆到载体pGPU6/GFP/Neo中构建RNA干扰重组载体，并对重组载体进行酶切和测序鉴定。通过阳离子脂质体介导重组载体转染HUVECs后，采用Western blot法筛选出沉默效率最高的重组载体，同时利用G418抗性筛选，获取阳性稳定转染细胞株，并用Western blot法进行鉴定。
结果：经酶切鉴定和测序分析证实，靶向IKKα和IKKβ基因的8个pGPU6/GFP/Neo-shRNA重组载体构建成功，分别命名为pGPU6/GFP/Neo-IKKα-shRNA1，2，3，4和pGPU6/GFP/Neo-IKKβ-shRNA1，2，3，4；Western blot结果显示HUVECs用高糖培养48h后，IKKα和IKKβ蛋白表达水平升高，与Control组相比具有显著性差异(P<0.01)；HUVECs分别转入IKKα-shRNA4和IKKβ-shRNA2干扰质粒，再用高糖培养48h后，IKKα和IKKβ蛋白水平明显下降，与高糖组比较具有显著性差异(P<0.01)。转染pGPU6/GFP/Neo-IKKβ-shRNA2的细胞经G418抗性筛选后，得到生长良好的单细胞克隆，Western blot结果显示pGPU6/GFP/Neo-IKKβ-shRNA2转染的G418抗性内皮细胞中IKKβ蛋白表达量明显下降，与Control组相比具有显著性差异(P<0.01)。
结论：成功构建了针对IKKα和IKKβ基因的shRNA真核表达载体，并建立了稳定低表达IKKβ基因的HUVECs系，为下一步研究IKKα和IKKβ基因功能奠定了良好的实验基础。