兔Epi-LASIK与Flap-free Epi-LASIK术后Haze形成的实验对比研究

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目的:观察比较Flap-free Epi-LASIK和Epi-LASIK两种术式术后角膜上皮下雾状混浊(Haze)的发生发展情况并初步探讨其机理。方法:健康新西兰大耳白兔21只,其中18只兔一眼行Flap-free Epi-LASIK另一眼行Epi-LASIK,用VISX20/20准分子激光仪作-10D切削,另3只兔作为空白对照。各组分别于术后1月、2月、3月共3个时间点定期在裂隙灯下进行Haze分级评估。随机选取各组动物6只眼,取角膜组织后三等分:一半切片用于组织学检测,另一半冻存用于分子生物学检测。第一部分:取角膜组织利用透射电镜、逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)等方法观察Haze相关指标。第二部分:用免疫组织化学方法检测转化生长因子(TGF-β2)和碱性成纤维细胞因子(b-FGF)的表达水平,比较和探讨其在两种术式术后Haze形成及发展过程中的作用。结果:术后各时间点,Haze分级水平与α-平滑肌动蛋白(α-SMA)及Ⅲ型胶原mRNA表达结果显示Flap-free Epi-LASIK和Epi-LASIK术后各时间点的组间差异均无统计学意义(P>0.05)。透射电镜检测结果发现,各组不同时间点上皮层结构及基底膜基本完整,1月及3月两实验组基质细胞均较正常,胶原排列比较整齐;2月两实验组基质细胞明显活跃,胶原排列紊乱。RT-PCR检测显示:术后各时间点Epi-LASIK组和Flap-free Epi-LASIK组Ⅲ型胶原mRNA的表达差异均无统计学意义;术后Ⅲ型胶原纤维mRNA的组内动态表达呈现出先升高后降低的特点,均在术后2月时达高峰。免疫组化检测显示:术后各时间点Epi-LASIK组和Flap-free Epi-LASIK组TGF-β2、b-FGF的表达差异无统计学意义(P>0.05);TGF-β2的表达水平组内比较呈逐渐下降的特点;b-FGF的表达水平在两实验组差异均无统计学意义(P>0.05),且均随时间延长呈持续升高的趋势。结论:兔Flap-free Epi-LASIK和Epi-LASIK术后Haze形成及发展程度相似;两种术式术后影响Haze形成及发展的关键调控因子TGF-β2和b-FGF表达无明显差异。
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