【摘 要】
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目的:运用多重荧光免疫组化（mf IHC/IF）技术检测和分析食管鳞癌（ESCC）组织中食管癌易感基因PLCE1、糖代谢相关分子ENO1和FBXW7的表达与肿瘤微环境内T细胞亚群分布的相关性及其临床病理意义,为探讨PLCE1通过ENO1调控糖酵解影响T细胞免疫功能的作用机制奠定基础。方法:（1）收集21例ESCC患者的临床病理信息和石蜡包埋组织并制作ESCC组织芯片;（2）普通免疫组化染色确定ES
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81773116、81560399）；
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目的:运用多重荧光免疫组化（mf IHC/IF）技术检测和分析食管鳞癌（ESCC）组织中食管癌易感基因PLCE1、糖代谢相关分子ENO1和FBXW7的表达与肿瘤微环境内T细胞亚群分布的相关性及其临床病理意义,为探讨PLCE1通过ENO1调控糖酵解影响T细胞免疫功能的作用机制奠定基础。方法:（1）收集21例ESCC患者的临床病理信息和石蜡包埋组织并制作ESCC组织芯片;（2）普通免疫组化染色确定ESCC组织中PLCE1、ENO1、FBXW7、CD4、CD8、PD1和PDL1等7种抗体的最适浓度,然后根据单色荧光IHC结果分别建立荧光信号光谱曲线图库,明确7种抗体相应的荧光染料和激发通道;（3）ESCC组织芯片上运用mf IHC技术进行前述7种抗体7轮连续染色,并进行全光谱高倍率扫描成像;（4）运用Strata Quest软件对21例ESCC组织中不同表型的癌细胞和T细胞亚型进行识别、定量以及空间分布,并分别识别距离不同表型ESCC细胞周围T细胞亚型的空间分布和数量;（5）运用R studio 4.0.3、SPSS 26.0和Graph Pad Prism 7.0软件进行统计学分析。结果:（1）21例ESCC组织中存在5种不同表型的ESCC细胞,其中ENO1+ESCC细胞数量最多（577.33,48.45%）,PLCE1+ENO1+PDL1+ESCC细胞最少（36.91,3.04%）,且PLCE1+ESCC细胞与ENO1+ESCC细胞、FBXW7+ESCC细胞均呈正相关（P均＜0.05）,但ENO1+ESCC细胞与FBXW7+ESCC细胞无显著相关性;（2）21例ESCC组织中存在4种T淋巴细胞亚型,其中CD4+T细胞最多（1312.29,51.43%）,CD8+PD1+T细胞最少（33.52,1.31%）;（3）21例ESCC组织中,PLCE1+、ENO1+和PLCE1+ENO1+ESCC细胞与CD4+、CD8+T细胞数量均呈正相关;而FBXW7+ESCC细胞与CD4+、CD4+PD1+T细胞数量呈正相关;（4）不同表型ESCC细胞周围间质中T淋巴细胞的空间分布显示,PLCE1+ESCC、FBXW7+ESCC和PLCE1+ENO1+ESCC细胞周围最多见的均为CD4+T淋巴细胞和CD4+PD1+T淋巴细胞,且CD4+T淋巴细胞以近距离分布为主（P＜0.0167）,而CD8+T淋巴细胞最少见且主要分布在中、远距离处;其他T淋巴细胞的空间分布无统计学差异;（5）不同表型的ESCC细胞与临床病理参数分析显示,PLCE1+ENO1+ESCC细胞高密度组与ESCC患者的预后不良相关（P=0.049）。结论:（1）食管鳞癌中PLCE1的表达与糖代谢相关分子ENO1和FBXW7表达呈正相关,提示其可能参与食管癌糖代谢的调控;（2）食管鳞癌间质中CD4+T淋巴细胞最常见,且主要分布在PLCE1+、FBXW7+和PLCE1+ENO1+食管鳞癌近距离处,而CD8+T淋巴细胞较少且主要分布在癌巢中、远距离处,提示食管癌中PLCE1相关的糖酵解可能影响微环境中CD4+/CD8+T淋巴细胞的免疫功能,但其作用和机制有待进一步研究证实。
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