干细胞因子（stem cell factor, SCF）是人体内重要的细胞因子,研究表明干细胞因子单独或协同多种细胞因子,参与机体多种生理过程,包括调动造血干细胞、祖细胞的增殖和分化、调节肥大细胞的发生和发育、胚胎期及成年后神经系统的生长分化、黑素细胞的存活、分化、移行和增生等,是一种能刺激多种细胞生长发育的多功能细胞因子,具有广阔的应用前景。目前在临床上干细胞因子主要被用于外周血干细胞移植（PBSCT）后,调动外周血干/祖细胞的增殖和分化。但是天然SCF来源有限,难以大规模生产,不能满足临床需要。研究表明,基因重组人SCF（rhSCF）和天然SCF具有相同的生物学活性。本研究的目的是通过克隆可溶性干细胞因子活性部分基因片段,并使其在高效原核表达载体中大量表达,经纯化得到得到高纯度蛋白,为干细胞因子的临床应用的进一步研究打下基础。 用Trizol提取人骨髓细胞总RNA,通过RT-PCR扩增出人可溶性干细胞因子的活性部分,回收RT-PCR产物,并将其克隆到pMD1 8-T载体中转化道大肠杆菌JM109中,蓝白筛选并酶切鉴定阳性重组质粒后进行测序。将测序正确的克隆片断定向连入原核表达载体pET32a（+）,然后转化到大肠杆菌JM109。筛选和鉴定正确地重组菌后,转化到BL21中经IPTG诱导表达,使其表达出SCF融合蛋白。扩大培养后,超声波破碎菌体,分离包涵体并溶于8M尿素,通过Ni²⁺亲和层析柱进行纯化。 克隆得到的活性部分基因与GeneBank报道的序列完全相同。重组质粒pET-SCF构建正确,在表达宿主菌中表达出了大约37KD大小的融合蛋白。融合蛋白主要存在于包涵体中,收集包涵体并溶于8M尿素后,用Ni²⁺亲和层析柱对溶解液进行纯化,得到的大部分融合蛋白,纯度达到90%。