【摘 要】
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大豆是我国重要的粮食作物,吉林省是我国大豆种植的主要产区,其优越的地理位置和适宜的气候条件为大豆提供了良好的生长发育环境。苜蓿花叶病毒（Alfalfa mosaic virus,AMV）是近年来吉林省新发的、能引起大豆严重病害的植物病毒,对农业生产造成了严重的损失。为明确吉林省大豆AMV感染情况,本研究以AMV的大豆中国分离物衣壳蛋白（Coat protein,CP）为抗原,通过免疫动物,获得AM
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大豆是我国重要的粮食作物,吉林省是我国大豆种植的主要产区,其优越的地理位置和适宜的气候条件为大豆提供了良好的生长发育环境。苜蓿花叶病毒（Alfalfa mosaic virus,AMV）是近年来吉林省新发的、能引起大豆严重病害的植物病毒,对农业生产造成了严重的损失。为明确吉林省大豆AMV感染情况,本研究以AMV的大豆中国分离物衣壳蛋白（Coat protein,CP）为抗原,通过免疫动物,获得AMV的抗体,建立了高效、精准的AMV血清学检测技术,并应用于吉林省大豆AMV感染情况调查,为吉林省大豆AMV病害防控的研究提供理论依据和技术支持。研究结果如下:1.从表现为花叶和叶片坏死症状的大豆植株上获得了AMV分离物,并成功克隆了AMV CP基因,运用同源重组法构建p ET-28-AMV CP重组载体并在大肠杆菌中诱导表达,经Ni2+亲和层析柱纯化得到AMV CP重组蛋白。2.以纯化后的AMV CP蛋白为免疫原,通过免疫BALB/c小鼠,成功制备3份AMV抗体。3份多克隆抗体对AMV CP重组蛋白和感染AMV的大豆叶片粗提液的效价均能达到256 000倍;特异性分析结果显示制备的3份多克隆抗体均能特异性识别AMV。3.成功建立了AMV间接ELISA检测方法,确定本方法最佳检测抗体为2号多克隆抗体;检测抗体和酶标抗体的最佳工作浓度均为250 ng/m L;最佳封闭时间为90 min;抗原最佳孵育时间为37℃2 h后4℃过夜;检测抗体最佳孵育时间为45 min;酶标抗体最佳孵育时间为1 h。本方法的最低检测限为46.7 ng/m L。通过建立的AMV间接ELISA与RT-PCR同时对采集的50份疑似感染AMV的大豆样品进行检测,有46份样品检测结果一致,符合率达92%。4.2021年8月,对吉林省五个大豆主产区的大豆植株进行AMV检测,检测结果显示病毒的阳性检出率达17.06%。其中敦化地区的阳性检出率最高,达29.93%,其次为抚松地区,其阳性检出率为26%,资源圃和公主岭地区的阳性检出率相对偏低,分别为12.9%和8.6%,辽源地区的阳性检出率最低,为6.67%。表明AMV在东北五个大豆产区已普遍存在。
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