肝缺血再灌注损伤中奥曲肽对HMGB1、CHOP、caspase11的影响

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目的:初步探讨在大鼠肝缺血再灌注损伤中奥曲肽对HMGB1、CHOP、caspase11的影响。方法:SPF级健康雄性SD(Sprague Dawley)大鼠24只,体重为180-220g,随机分为假手术+生理盐水组(CTR组,n=8)、肝缺血再灌注+生理盐水组(HIR组,n=8),肝缺血再灌注+奥曲肽组(Oct.+HIR组,n=8)。CTR组和HIR组于术前30分钟腹腔注射2ml生理盐水,Oct.+HIR组术前30分钟腹腔注射2ml奥曲肽(0.01mg/ml)溶液。待药液吸收后,三组均采取10%水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射麻醉,麻醉后沿腹正中线切开,分离肝十二指肠韧带,CTR组只游离门静脉;HIR组、Oct.+HIR组游离门静脉后用血管钳夹闭30分钟后,松开血管钳再灌注2小时后取标本。每只大鼠(1)心脏取血,提取血清,用全自动生化仪检测ALT、AST的表达水平;(2)取部分肝组织使用HE染色观察肝组织结构变化;(3)使用Western blot检测肝组织内HMGB1总蛋白的表达,并分别检测胞浆、胞核中HMGB1蛋白的表达;(4)使用Western blot检测肝组织CHOP、caspase11蛋白的表达;(5)取部分肝组织标本采用TUNEL染色检测细胞焦亡水平。SPSS19.0软件进行统计学分析。结果:(1)三组SD大鼠体重无明显差异(p>0.05);(2)HIR组血清AST、ALT表达水平明显高于CTR组,有统计学差异(p<0.05),Oct.+HIR组血清AST、ALT表达水平低于HIR组,有统计学差异(p<0.05);(3)HE染色结果显示,CTR组:肝组织结构正常;HIR组:肝窦明显扩张、淤血,有大量炎性细胞浸润和坏死;Oct.+HIR组:肝窦轻度扩张,可见肝细胞轻度水肿和点状坏死;(4)Western Blot检测结果显示:三组肝脏组织中HMBG1蛋白表达情况,HIR组与CTR组相比,肝组织HMGB1蛋白表达明显升高,有统计学差异(p<0.05);Oct.+HIR组与HIR组相比,肝组织HMGB1蛋白表达明显降低,有统计学差异(p<0.05)。在胞核中,三组HMGB1表达量无明显统计学差异;而在胞浆中,HIR组HMBG1表达量明显高于CTR组,有统计学差异(p<0.05),Oct.+HIR组HMGB1表达量低于HIR组,有统计学差异(p<0.05);(5)Western Blot检测结果显示,HIR组CHOP、caspase11表达量明显高于CTR组,有统计学差异(p<0.05),Oct.+HIR组CHOP、caspase11表达量低于HIR组,有统计学差异(p<0.05);(6)TUNEL检测焦亡细胞计数:CTR组中阳性细胞明显低于HIR组和Oct.+HIR组,Oct.+HIR组中阳性细胞计数低于HIR组,差异均有统计学差异(p<0.05)。结论:(1)奥曲肽可抑制肝缺血再灌注损伤中HMGB1蛋白在胞浆内表达的增加;(2)奥曲肽可抑制HMGB1、CHOP、caspase11的表达从而减轻肝缺血再灌注损伤。
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