目的:德朗热综合征（Cornelia de Lange Syndrom,CDLS）是由于发育早期多种基因表达异常引起的临床罕见疾病,主要的临床特征是骨骼发育畸形。目前研究表明,NIPBL基因低表达与CDLS患者骨骼发育异常密切相关[1]。本实验通过敲低骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）中的NIPBL基因,使其低表达,探讨NIPBL基因对BMSCs在成骨分化方面的影响及可能的机制,为CDLS患儿骨骼畸形的可逆性治疗提供新的理论依据。方法:C57BL/6的专用细胞培养基培养BMSCs至第3代,用细胞免疫荧光检测BMSCs表面抗原CD44的表达验证细胞种类。培养BMSCs至对数期后,按照慢病毒感染复数（multiplicity of infection,MOI）为20、40、60、80分别预转染BMSCs,找到其最适MOI。按照最适MOI转染NIPBL-sh RNA（5,-GCATCCGAGTCTAATGTTTGA-3,）和空载体慢病毒（sh RNA-NC）,观察细胞荧光量达80%-90%时筛选稳转细胞系,实时荧光定量PCR（QRT-PCR）检测细胞稳转后NIPBL m RNA的相对表达量,验证NIPBL低表达组的BMSCs细胞系是否构建成功。BMSCs分为空白组、空载体组及NIPBL敲低组,相同条件下用成骨诱导培养基培养,定期观察各组细胞形状、钙盐结节等变化情况。在成骨诱导第21天用茜素红染色（Alizarin staining）检测细胞的钙盐成分,并用免疫印迹实验（Western-blot）检测β连环蛋白（β-catenin）及磷酸化β连环蛋白（P-β-catenin）的表达量,QRT-PCR检测Lrp5 m RNA的表达情况。结果:（1）与空载体组及空白组比较,经慢病毒转染后的敲低组中NIPBL m RNA的相对表达量明显降低,存在统计学差异（P＜0.05）。空载体组与空白组NIPBL m RNA的相对表达量相当,无统计学差异（P＞0.05）。这表示已成功建立了NIPBL基因低表达的细胞系,并且病毒衣壳对NIPBL基因的正常表达没有明显影响。（2）三组细胞在成骨分化过程中形态发生了明显变化,诱导第21天Alizarin染色发现NIPBL敲低组形成的红色钙盐颗粒比空白组和空载体组少,结果提示敲低NIPBL可以抑制BMSCs的成骨分化。（3）在成骨定向诱导21天后,NIPBL敲低组的β-catenin蛋白、P-β-catenin蛋白以及Lrp5 m RNA表达水平均低于空白组和空载体组,存在统计学差异（P＜0.001）;空白组和空载体组的β-catenin蛋白、P-β-catenin蛋白以及Lrp5 m RNA表达水平无统计学差异（P＞0.05）。结论:慢病毒敲低BMSCs中NIPBL基因的表达抑制了其成骨定向分化,Wnt/β-catenin通路中表面受体Lrp5、转录共调节分子β-catenin表达也随之下降,但P-β-catenin（失活状态）表达上升。这表明Wnt/β-catenin通路可能参与了NIPBL基因突变所致的Cd LS骨骼发育异常的过程。