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目的:制作大鼠大脑缺血2小时再灌注4小时模型,即中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,从N-甲基-D-天冬氨酸受体3(N-methyl-D-aspartate Receptor 3,NR3)亚基入手,探讨NR3亚基在可乐定对急性局灶性脑缺血大鼠神经保护效应中的作用。方法:选用10周龄雄性SD大鼠,分成假手术组、缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)组、可乐定20μg/kg组、可乐定40μg/kg组、育亨宾5 mg/kg+可乐定40μg/kg组、MK-801阳性对照组;预给药一周,假手术组和缺血组给予生理盐水,其他各组给予相应药物。(1)制作大鼠MCAO模型,缺血2小时再灌注4小时后进行神经行为学评分和TTC染色。(2)利用HE染色观察急性局灶性脑缺血后各组大鼠皮层及海马各区神经元形态变化。(3)利用实时荧光定量PCR检测急性局灶性脑缺血后各组大鼠NR3A、NR3B m RNA在皮层及海马的表达水平。(4)利用免疫组化技术检测急性局灶性脑缺血后各组大鼠NR3A、NR3B分子在皮层及海马各区的表达水平。(5)利用免疫印迹技术检测急性局灶性脑缺血后各组大鼠NR3A、NR3B总蛋白在皮层及海马的表达水平。(6)利用免疫印迹技术检测急性局灶性脑缺血后各组大鼠NR3A、NR3B细胞膜蛋白在皮层及海马的表达水平。结果:(1)TTC染色结果显示:与假手术组比,缺血组梗死体积明显增加(P<0.01),与缺血组比,可乐定20μg/kg组、可乐定40μg/kg组与MK-801组梗死体积明显降低(P<0.05,P<0.01),而与可乐定20μg/kg组比,可乐定40μg/kg组梗死体积进一步降低(P<0.05),而加用育亨宾后梗死体积又明显增加(P<0.05)。神经功能评分结果显示:缺血组神经功能评分明显增加(P<0.01),而与缺血组比,可乐定40μg/kg组神经功能评分明显降低(P<0.05)。(2)HE染色结果显示:缺血组皮层及海马各区存在缺血性改变,受损神经元数目增加(P<0.01),细胞排列紊乱,形态不规则。可乐定20μg/kg组及可乐定40μg/kg组皮层及海马各区神经元损伤减轻,细胞排列较整齐,细胞空泡减少,受损神经元数量减少(P<0.01)。与可乐定20μg/kg组比,可乐定40μg/kg组皮层及海马各区神经元损伤现象进一步减轻(P<0.01)。与可乐定40μg/kg组比,育亨宾+可乐定40μg/kg组皮层及海马各区神经元损伤加重(P<0.01),细胞排列紊乱,形态不规则。(3)实时荧光定量PCR结果显示:缺血后皮层组织NR3A、NR3B m RNA表达增加(P<0.01);使用可乐定后表达降低(P<0.01,P<0.05),而海马与皮层呈现大致相反的趋势;加用育亨宾后皮层海马NR3B m RNA、海马NR3A m RNA表达下降(P<0.01)。(4)免疫组化结果显示:NR3A、NR3B主要在胞膜及胞浆中表达,缺血后NR3A、NR3B在皮层及海马各区表达降低(P<0.01),使用可乐定后在皮层及海马各区表达增加(P<0.01,P<0.05),加用育亨宾后表达降低(P<0.01,P<0.05)。(5)NR3A、NR3B总蛋白免疫印迹结果显示:在皮层及海马,缺血后NR3A、NR3B总蛋白表达降低(P<0.01),使用可乐定后皮层NR3A、NR3B总蛋白表达增加(P<0.01),而海马可乐定20μg/kg组NR3A、NR3B总蛋白表达增加(P<0.01),而加用育亨宾后在皮层及海马表达降低(P<0.01)。(6)NR3A、NR3B细胞膜蛋白免疫印迹结果显示:缺血后皮层NR3A、NR3B及海马NR3B细胞膜蛋白及膜蛋白与总蛋白比值表达降低(P<0.01,P<0.05),使用可乐定后表达增加(P<0.01),而加用育亨宾后表达降低(P<0.01);缺血后海马NR3A细胞膜蛋白及膜蛋白与总蛋白比值表达增加(P<0.01),可乐定40μg/kg组海马NR3A细胞膜蛋白与总蛋白比值表达增加(P<0.01);加用育亨宾后海马NR3A细胞膜蛋白及膜蛋白与总蛋白比值表达降低(P<0.01)。结论:(1)可乐定能够降低急性局灶性脑缺血大鼠的脑梗死体积及改善神经行为学评分,具有神经元保护作用,并且呈一定剂量依耐性。(2)可乐定能够上调NR3亚基对急性局灶性脑缺血大鼠发挥神经保护作用,NMDA受体NR3亚基参与了可乐定对急性局灶性脑缺血大鼠发挥神经保护作用的分子机制。(3)大鼠大脑缺血2小时再灌注4小时后NR3亚基发生了膜转位,可乐定能够上调急性局灶性脑缺血大鼠NR3亚基膜转位。