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第一部分MiR-1291通过靶向调控PGF参与子痫前期发病目的探究miR-1291和PGF在PE和正常胎盘中的表达水平以及miR-1291与PGF靶向调控关系。方法1.收集PE和正常妊娠胎盘组织。实验组为符合PE诊断标准的单胎妊娠孕妇20例,对照组为随机选取的20例同期住院同年龄组剖宫产分娩的正常健康孕妇。2.通过免疫荧光染色定位PGF在胎盘组织中的表达,通过RT-PCR、Western blot和免疫组化实验检测PE和正常胎盘组织中PGF mRNA和蛋白的表达水平。3.通过RT-PCR实验检测PE和正常胎盘中miR-1291的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-1291对PGF的靶向调控关系。结果1.免疫荧光实验结果提示,PGF主要定位于滋养细胞,部分定位于内皮细胞。与正常妊娠相比,PGF mRNA和蛋白在PE胎盘组织中表达水平显著降低。2.在PE胎盘组织中miR-1291表达水平较正常妊娠组显著上调。3.双荧光素报告基因实验结果显示miR-1291可以与PGF mRNA 3’UTR特异性结合使荧光素酶活性明显减低,突变组荧光素酶活性无显著差异。结论1.PE组与正常妊娠组相比,胎盘组织中miR-1291表达异常升高,PGF表达异常降低。2.miR-1291可以特异性的结合PGF mRNA3’UTR,靶向调控PGF表达,参与PE发病。第二部分miR1291通过PGF调控滋养细胞和内皮细胞功能目的探究miR-1291对滋养细胞和内皮细胞中PGF表达的影响,研究miR-1291对滋养细胞增殖、迁移和侵袭功能的影响,对内皮细胞增殖和成管功能的影响。方法1.在 JEG-3 和 HUVEC 中转染 miR-1291 mimic/NC、inhibitor/NC 后,通过 RT-PCR 和Western blot实验检测PGF表达水平变化。2.在 JEG-3 中转染 miR-1291 mimic/NC、inhibitor/NC 后,分别通过 CCK8 实验、Transwell、Invasion实验检测细胞增殖、迁移和侵袭功能变化。3.在HUVEC中转染miR-1291 mimic/NC、inhibitor/NC后,分别使用CCK8和体外成管实验检测细胞增殖和成管功能变化。结果1.在 JEG-3 和 HUVEC 中转染 miR-1291 mimic/NC 或 miR-1291 inhibitor/NC,检测 JEG-3和HUVEC中PGF mRNA和蛋白表达水平,实验结果显示,miR-1291 mimic组PGF表达水平与对照组相比显著降低,miR-1291 inhibitor组PGF表达水平与对照组相比显著升高。2.CCK8 实验结果显示,miR-1291 mimic 和 inhibitor 组在 24h、48h 和 72h 时,JEG-3 和HUVEC细胞存活率与对照组相比均无明显改变,miR-1291对JEG-3和HUVEC增殖功能均无显著影响。3.Transwell、Invasion实验结果显示,miR-1291 mimic组JEG-3细胞迁移和侵袭功能与对照组相比明显下降,miR-1291 inhibitor组细胞迁移和侵袭功能与对照组相比明显增强。4.成管实验结果显示,miR-1291mimic组HUVEC成管功能与对照组相比明显降低,miR-1291inhibitor组成管功能与对照组相比明显增强。结论MiR-1291可以通过抑制PGF表达进而导致JEG-3迁移侵袭功能障碍和HUVEC成管功能异常。第三部分阿司匹林对滋养细胞和内皮细胞中miR-1291/PGF表达和细胞功能的影响目的探究阿司匹林对滋养细胞和内皮细胞miR-1291/PGF的表达调控,及其对miR-1291诱导的细胞功能障碍的影响。方法1.使用不同浓度的阿司匹林（0、0.5、1、2mM）处理JEG-3,用RT-PCR和Western blot实验检测JEG-3中miR-1291和PGF表达变化。用1mM阿司匹林处理HUVEC,用RT-PCR和Western blot实验检测miR-1291和PGF表达水平变化。2.JEG-3 转染 miR-1291 mimic 后,用 1mM 阿司匹林处理细胞,通过 Transwell、Invasion实验探究细胞迁移和侵袭功能的变化。3.HUVEC转染miR-1291 mimic后,用1mM阿司匹林处理细胞,通过体外成管实验检测细胞成管功能变化。结果1.分别用0、0.5、1、2mM浓度的阿司匹林处理JEG-3后,用RT-PCR和Western blotting实验检测miR-1291和PGF表达水平,实验结果显示,不同浓度阿司匹林均可显著抑制miR-1291表达,促进PGF表达。用1mM阿司匹林处理HUVEC后,发现也可以显著抑制miR-1291表达,促进PGF表达。因此选取1mM浓度用于后续实验。2.Transwell、Invasion实验结果显示,阿司匹林+miR-1291mimic组JEG-3细胞迁移和侵袭功能较miR-1291 mimic组均明显增强,与对照组无明显差异。3.体外成管实验结果显示,阿司匹林+miR-1291mimic组HUEVC成管功能较miR-1291 mimic组明显增强,与对照组无明显差异。结论阿司匹林可以通过抑制miR-1291表达进而促进PGF表达,并改善miR-1291诱导的滋养细胞和内皮细胞功能障碍,可能是其预防子痫前期发生发展的机制之一。