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目的:通过比较分析危重症新生儿与非危重症新生儿早期肠道菌群种类、多样性和丰度的差异,探讨危重症新生儿肠道菌群的变化特征,为新生儿重症监护病房患儿进行早期重症感染筛查和死亡风险的预测提供帮助,为危重症新生儿的评估和治疗寻找新的方向。方法:选取2020年10月至2021年09月期间在海南医学院第二附属医院产科出生后即转入新生儿科住院治疗并在生后1周内进行粪便样本采集的新生儿,满足出生体重≥1500g,出生胎龄≥28周,出生方式为剖宫产,并排除存在复杂腹裂、心脏畸形、遗传代谢性疾病、膈疝、消化道畸形、母亲妊娠期间应用过益生菌制剂等情况的新生儿,共纳入55例新生儿。将55例新生儿按新生儿危重病例评分分为危重新生儿组30例,其中男15例(50%),出生胎龄(35.6±1.6)周,非危重新生儿组25例,其中男14例(56%),出生胎龄(36.4±2.1)周。进一步按胎龄分为危重早产儿组(28周<X<37周)18例,危重足月儿组(37周<X<42周)12例,非危重早产儿组(28周<X<37周)15例,非危重足月儿组(37周<X<42周)10例。应用Illumina高通量测序技术对粪便标本中所有细菌的16S r RNA-V3~V4区进行DNA测序,分析物种丰度和分布。对结果进行统计学分析。本项目已经通过医院伦理委员会审查。结果:(1)危重新生儿组共输出2324个操作分类单元(operational taxonomic units,OTU),非危重新生儿组共输出6050个OTU,其中两组共有330个OTU重叠。55个样本一共得到790个物种分类,包括30个门水平物种,78个纲水平物种,126个目水平物种,188个科水平物种,252个属水平物种和116个种水平物种。(2)门水平上,危重症新生儿组排名前4的优势肠道菌群为放线菌门[96(51,687)个]、厚壁菌门[62106(20698,71226)个]、变形菌门[3958(1967,50205)个]、拟杆菌门[4(2,12)个]。非危重新生儿组排名前4的优势肠道菌群为放线菌门[372(131,1081)个]、厚壁菌门[13219(4313,53199)个]、变形菌门[23100(2282,60312)个]、拟杆菌门[2(1,166)个],两组间厚壁菌门、放线菌门相比较P值分别为0.017、0.031,均小于0.05,该差异具有统计学意义。(3)菌落丰富度及多样性方面,危重新生儿组的Shannon指数(1.69±0.83),Simpson指数(0.46±0.24)均低于非危重新生儿组的Shannon指数(3.25±2.21),Simpson指数(0.69±0.21)。两组Shannon指数与Simpson指数相比较P值分别为0.001、0.001,均小于0.05,该差异有统计学意义。(4)危重组足月儿组12例,非危重足月儿组10例,门水平上,危重症足月儿组排名前4的优势肠道菌群为放线菌门[333(54,1414)个]、厚壁菌门[65179(43369,73773)个]、变形菌门[2759(1870,32243)个]、拟杆菌门[3(1,19)个]。非危重足月儿组排名前4的优势肠道菌群为放线菌门[229(85,2129)个]、厚壁菌门[26326(4332,73084)个]、变形菌门[35942(1449,59186)个]、拟杆菌门[5(2,8)个],两组间厚壁菌门、放线菌门、变形菌门、拟杆菌门相比较P值分别为0.364、0.657、0.374、0.592,均大于0.05,该差异无统计学意义。(5)菌落丰富度及多样性方面,危重足月儿组的Shannon指数(1.43±0.76)、Simpson指数(0.40±0.23)均低于非危重足月儿组的Shannon指数(2.26±1.07)、Simpson指数(0.59±0.24),但两组Shannon指数与Simpson指数相比较P值分别为0.297、0.34,均大于0.05,该差异无统计学意义。(6)危重组早产儿组18例,非危重早产儿组15例,门水平上,危重早产儿组排名前4的优势肠道菌群为放线菌门[89(46,440)个]、厚壁菌门[56555(6736,70749)个]、变形菌门[7053(2409,59313)个]、拟杆菌门[5(1,15)个]。非危重早产儿组排名前4的优势肠道菌群为放线菌门[426(195,1784)个]、厚壁菌门[11511(4372,51403)个]、变形菌门[12612(2036,60146)个]、拟杆菌门[2(1,29)个],两组间放线菌门相比较P值为0.016,小于0.05,该差异具有统计学意义。(7)菌落丰富度及多样性方面,危重早产儿组的Shannon指数(1.81±0.84)、Simpson指数(0.49±0.24)均低于非危重早产儿组的Shannon指数(3.63±2.51)、Simpson指数(0.72±0.21)。两组Shannon指数与Simpson指数相比较P值分别为0.02、0.016,均小于0.05,该差异有统计学意义。(8)功能预测显示,危重新生儿组的代谢功能(70.5978%)低于非危重新生儿组的代谢功能(71.9409%),P值0.002小于0.05。危重新生儿组细胞过程相关功能(4.9461%)低于非危重新生儿组的细胞过程相关功能(5.4629%),P值0.004小于0.05。危重新生儿组环境信息处理功能(4.9418%)高于非危重新生儿组的环境信息处理功能(4.2929%),P值0.003小于0.05。该差异有统计学意义。结论:1、在新生儿早期肠道菌群的建立过程中,虽病情危重程度有差异,但肠道菌群在门水平的分布上,危重新生儿组与非危重新生儿组肠道菌群的主要的优势菌群大致相同。2、在危重新生儿与非危重新生儿中,危重新生儿的肠道菌群多样性及丰富度低于非危重新生儿。厚壁菌门的丰度大小与新生儿病情危重程度呈正相关性,放线菌门的丰度大小与新生儿病情危重程度呈负相关性。3、在新生儿早期肠道菌群建立过程中的,危重症环境对早产儿的影响程度高于对足月儿的影响。4、新生儿肠道微生态多样性的差异会导致微生物代谢功能的差异。