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目的:本研究通过建立子痫前期大鼠模型,探讨不同剂量补肾活血方对子痫前期大鼠模型血栓前状态中血小板、凝血四项、血栓弹力图及胎盘、胎仔生长发育的影响及意义,免疫组化法研究TFPI-2在胎盘中的表达。
方法:选用一氧化氮合成酶抑制剂——左旋亚硝基精氨酸甲酯(L-NAME)作为造模药物,将所购大鼠适应性喂养1周后雌雄以2:1比例合笼,晨起阴道涂片发现精子为妊娠第1天;所有大鼠妊娠前测量基础血压作为参考,于孕12天开始皮下注射造模药物,给药后3天测量大鼠收缩压,将血压上升30mmHg视为造模成功。去除干预过程中早产、灌胃及不明原因死亡孕鼠,最终剩余造模成功大鼠72只。按随机数字表法分为6组,每组12只。①正常妊娠组:12-19d皮下注射生理盐水;②子痫前期组:13-19d皮下注射L-NAME;③阿司匹林组:13-19d皮下注射L-NAME+16-19d阿司匹林灌胃;④补肾活血方低剂量组:13-19d皮下注射L-NAME+16-20d补肾活血方低剂量灌胃;⑤补肾活血方中剂量组:13-19d皮下注射L-NAME+16-20d补肾活血方中剂量灌胃;⑥补肾活血方高剂量组:13-19d皮下注射L-NAME+16-20d补肾活血方高剂量灌胃。分别于妊娠前、妊娠第10、15、20天测量大鼠收缩压;妊娠第10、15、20天检测24h尿蛋白;孕21天麻醉后腹主动脉取血检测血小板、凝血四项、血栓弹力图;剖宫取胎评价仔代发育;取胎盘免疫组化检测TFPI-2的表达;将实验结果进行统计分析。
结果:
1.收缩压及24h尿蛋白:与正常妊娠组相比,子痫前期组收缩压及24h尿蛋白显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与子痫前期组相比,干预后补肾活血方中剂量组收缩压及24h尿蛋白下降较明显,差异明显具有统计学意义(P<0.01);与阿司匹林组相比,补肾活血方高剂量组收缩压及24h尿蛋白不明显,差异不具有统计学意义(P>0.05)。
2.血小板、凝血四项:与正常妊娠组相比,造模后子痫前期组大鼠血小板、凝血四项明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与子痫前期组相比,补肾活血方中剂量组干预后PLT下降、PT、APTT、TT下降、FBG升高,明显优于补肾活血方低剂量及高剂量组,差异明显具有统计学意义(P<0.01);阿司匹林组及补肾活血方高剂量组组间比较差异不具有统计学意义(P>0.05)。
3.血栓弹力图:与正常妊娠组相比,子痫前期组血栓弹力图R值下降、Angle、MA及CI明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);K值无明显变化,差异不具有统计学意义(P>0.05);与子痫前期组相比,补肾活血方中剂量组干预后R值升高、Angle、MA及CI下降,差异具有显著统计学意义(P<0.05)。
4.胎盘、胎仔数量及质量:与正常妊娠组相比,子痫前期组胎盘数量、胎盘质量、胎仔数量、胎仔质量及胎仔顶臀长均有不同程度下降,差异有统计学意义(P<0.05);与子痫前期组相比,补肾活血方中剂量组胎盘体数量、质量、胎仔数量、质量及胎仔顶臀长明显上升,差异具有明显统计学意义(P<0.05);与阿司匹林组比,补肾活血方高剂量组胎盘数量、胎盘质量、胎仔数量、胎仔质量及顶臀长差异具有统计学意义(P<0.05)。
5.TFPI-2:与正常妊娠组相比,子痫前期孕鼠胎盘中TFPI-2表达明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05);干预后各组胎盘中TFPI-2表达呈不同程度下降,其中,补肾活血方中剂量组差异具有显著统计学意义(P<0.05);补肾活血方高、低剂量组和阿司匹林组作用差异不明显,不具有统计学意义(P>0.05)。
结论:通过实验研究证明补肾活血方能不同程度改善孕鼠血小板、凝血指标,减少胎盘微血栓形成,改善大鼠仔代发育,提高妊娠存活率,减少TFPI-2在大鼠胎盘组织中的表达。
方法:选用一氧化氮合成酶抑制剂——左旋亚硝基精氨酸甲酯(L-NAME)作为造模药物,将所购大鼠适应性喂养1周后雌雄以2:1比例合笼,晨起阴道涂片发现精子为妊娠第1天;所有大鼠妊娠前测量基础血压作为参考,于孕12天开始皮下注射造模药物,给药后3天测量大鼠收缩压,将血压上升30mmHg视为造模成功。去除干预过程中早产、灌胃及不明原因死亡孕鼠,最终剩余造模成功大鼠72只。按随机数字表法分为6组,每组12只。①正常妊娠组:12-19d皮下注射生理盐水;②子痫前期组:13-19d皮下注射L-NAME;③阿司匹林组:13-19d皮下注射L-NAME+16-19d阿司匹林灌胃;④补肾活血方低剂量组:13-19d皮下注射L-NAME+16-20d补肾活血方低剂量灌胃;⑤补肾活血方中剂量组:13-19d皮下注射L-NAME+16-20d补肾活血方中剂量灌胃;⑥补肾活血方高剂量组:13-19d皮下注射L-NAME+16-20d补肾活血方高剂量灌胃。分别于妊娠前、妊娠第10、15、20天测量大鼠收缩压;妊娠第10、15、20天检测24h尿蛋白;孕21天麻醉后腹主动脉取血检测血小板、凝血四项、血栓弹力图;剖宫取胎评价仔代发育;取胎盘免疫组化检测TFPI-2的表达;将实验结果进行统计分析。
结果:
1.收缩压及24h尿蛋白:与正常妊娠组相比,子痫前期组收缩压及24h尿蛋白显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与子痫前期组相比,干预后补肾活血方中剂量组收缩压及24h尿蛋白下降较明显,差异明显具有统计学意义(P<0.01);与阿司匹林组相比,补肾活血方高剂量组收缩压及24h尿蛋白不明显,差异不具有统计学意义(P>0.05)。
2.血小板、凝血四项:与正常妊娠组相比,造模后子痫前期组大鼠血小板、凝血四项明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与子痫前期组相比,补肾活血方中剂量组干预后PLT下降、PT、APTT、TT下降、FBG升高,明显优于补肾活血方低剂量及高剂量组,差异明显具有统计学意义(P<0.01);阿司匹林组及补肾活血方高剂量组组间比较差异不具有统计学意义(P>0.05)。
3.血栓弹力图:与正常妊娠组相比,子痫前期组血栓弹力图R值下降、Angle、MA及CI明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);K值无明显变化,差异不具有统计学意义(P>0.05);与子痫前期组相比,补肾活血方中剂量组干预后R值升高、Angle、MA及CI下降,差异具有显著统计学意义(P<0.05)。
4.胎盘、胎仔数量及质量:与正常妊娠组相比,子痫前期组胎盘数量、胎盘质量、胎仔数量、胎仔质量及胎仔顶臀长均有不同程度下降,差异有统计学意义(P<0.05);与子痫前期组相比,补肾活血方中剂量组胎盘体数量、质量、胎仔数量、质量及胎仔顶臀长明显上升,差异具有明显统计学意义(P<0.05);与阿司匹林组比,补肾活血方高剂量组胎盘数量、胎盘质量、胎仔数量、胎仔质量及顶臀长差异具有统计学意义(P<0.05)。
5.TFPI-2:与正常妊娠组相比,子痫前期孕鼠胎盘中TFPI-2表达明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05);干预后各组胎盘中TFPI-2表达呈不同程度下降,其中,补肾活血方中剂量组差异具有显著统计学意义(P<0.05);补肾活血方高、低剂量组和阿司匹林组作用差异不明显,不具有统计学意义(P>0.05)。
结论:通过实验研究证明补肾活血方能不同程度改善孕鼠血小板、凝血指标,减少胎盘微血栓形成,改善大鼠仔代发育,提高妊娠存活率,减少TFPI-2在大鼠胎盘组织中的表达。