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目的:研究醒髓汤联合神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠运动功能、伤区病理改变以及胶质纤维酸性蛋白表达的影响,探究“破血逐瘀方”-醒髓汤对脊髓损伤后神经干细胞移植分化的诱导作用,综合揭示此联合疗法修复脊髓损伤的机制。
方法:60只SD大鼠随机分4组,模型组(A组)采用钳夹法建立T11脊髓压迫损伤模型;神经干细胞组(B组)在建模后利用微量注射器于损伤局部移植5ul含2×105cell的脑源性大鼠神经干细胞悬液;醒髓汤组(C组)自建模后第1d起予醒髓汤煎剂灌胃,灌胃剂量按照1ml/100g体质量;联合组(D组)在建模后局部移植2×105cell的神经干细胞悬液5ul,建模后第1d起予醒髓汤灌胃,标准为1ml/100g体质量。分别于脊髓损伤后3个时间节点(1周、2周、3周)按照BBB评分对大鼠进行行为学评分,运用HE染色法观察损伤脊髓的病理改变,免疫组化检测GFAP蛋白的表达情况。
结果:①神经干细胞培养及鉴定:神经干细胞呈悬浮生长,大部分成团聚集为神经球,经Nestin免疫荧光法鉴定后其阳性指数>90%。②BBB评分:3个时间点A组评分均不及其余3组(P<0.05);2周和3周时,D组评分均明显高于B组和C组(P<0.05)。③HE染色:A组各时间点的脊髓组织均呈现点、片状出血,炎性细胞浸润,细胞结构破坏且排列紊乱,存在多个且较大空洞;其余3组损伤程度轻于A组,3周时D组脊髓组织内出血基本消失,细胞形态和结构趋于正常。④免疫组化:A组在2周时胞浆内可见大量深染的棕色或棕褐色GFAP阳性表达;各个时间点D组GFAP阳性表达量均低于其余三组,尤以3周时GFAP染色最浅且数量最少(P<0.01)。
结论:“破血逐瘀方”-醒髓汤能够有效诱导外源性移植的神经干细胞在体分化的方向,通过下调神经干细胞向星形胶质细胞特化抑制胶质瘢痕的形成、改善脊髓损伤后的病理变化、加速肢体运动功能障碍的恢复,促进脊髓损伤后神经功能的修复。
方法:60只SD大鼠随机分4组,模型组(A组)采用钳夹法建立T11脊髓压迫损伤模型;神经干细胞组(B组)在建模后利用微量注射器于损伤局部移植5ul含2×105cell的脑源性大鼠神经干细胞悬液;醒髓汤组(C组)自建模后第1d起予醒髓汤煎剂灌胃,灌胃剂量按照1ml/100g体质量;联合组(D组)在建模后局部移植2×105cell的神经干细胞悬液5ul,建模后第1d起予醒髓汤灌胃,标准为1ml/100g体质量。分别于脊髓损伤后3个时间节点(1周、2周、3周)按照BBB评分对大鼠进行行为学评分,运用HE染色法观察损伤脊髓的病理改变,免疫组化检测GFAP蛋白的表达情况。
结果:①神经干细胞培养及鉴定:神经干细胞呈悬浮生长,大部分成团聚集为神经球,经Nestin免疫荧光法鉴定后其阳性指数>90%。②BBB评分:3个时间点A组评分均不及其余3组(P<0.05);2周和3周时,D组评分均明显高于B组和C组(P<0.05)。③HE染色:A组各时间点的脊髓组织均呈现点、片状出血,炎性细胞浸润,细胞结构破坏且排列紊乱,存在多个且较大空洞;其余3组损伤程度轻于A组,3周时D组脊髓组织内出血基本消失,细胞形态和结构趋于正常。④免疫组化:A组在2周时胞浆内可见大量深染的棕色或棕褐色GFAP阳性表达;各个时间点D组GFAP阳性表达量均低于其余三组,尤以3周时GFAP染色最浅且数量最少(P<0.01)。
结论:“破血逐瘀方”-醒髓汤能够有效诱导外源性移植的神经干细胞在体分化的方向,通过下调神经干细胞向星形胶质细胞特化抑制胶质瘢痕的形成、改善脊髓损伤后的病理变化、加速肢体运动功能障碍的恢复,促进脊髓损伤后神经功能的修复。