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1目的:本课题组前期体外实验已经证实[1]:将Ad-GFP缺陷性腺病毒为载体介导VEGF 165基因转染HUVEC与BMSCs体外共培养,血管内皮细胞的增殖、迁移和成管能力比未转染基因的共培养组及单独转染基因组强,空载体转染组对细胞的增殖、移行、成管能力无明显影响。然而,由于体内外微环境差异较大,影响血管生成的因素千差万别。因此,本实验采用大鼠背部缺血皮瓣模型（Ischemic skin flap）,BMSCs与VEGF 165基因转染的HUVEC共移植治疗,观察该缺血皮瓣的存活及血管生成情况,同时检测血液中VEGF浓度,探讨BMSCs与VEGF 165基因转染的HUVEC共移植体内后促进血管生成的能力,为构建血管化组织工程骨修复大段骨缺损提供理论依据和实验基础。方法:1、无菌条件下取6-8周龄雄性SD大鼠（250-300g）双下肢胫骨及股骨骨髓,体外分离、培养BMSCs。常规复苏HUVEC后体外培养,经缺陷性腺病毒介导VEGF 165基因转染HUVEC。2、各组细胞经体外培养后采用血球计数板计数各组细胞数量,根据细胞计数数据将移植细胞定容后备用。3、50只大鼠完全随机分入A、B、C、D、E五组,每组10只。在SD大鼠背部中线上建立一个4cm×1.5cm（长×宽）大小的缺血皮瓣模型,将BMSCs和VEGF 165基因转染的HUVEC共同移植入大鼠背部缺血皮瓣基底部并观察其皮瓣存活状况。实验分组:A组:移植BMSCs与VEGF 165基因转染的HUVEC;B组:移植单独转染VEGF 165基因的HUVEC;C组:移植BMSCs与未转染VEGF165基因的HUVEC;D组:单独移植未转染VEGF 165基因的HUVEC;E组:空白对照组,即只注射DMEM培养基。分别将A、B、C、D、E五组已计数、定容后的细胞在缺血皮瓣建模术后于皮瓣中轴线距离蒂部1cm、2cm、3cm处多点注射等体积培养液至皮瓣基底部。4、观察指标:（1）皮瓣术后每天观察皮瓣大体状况;（2）分别在皮瓣术后第2d、4d、7d、14d抽取外周血标本进行VEGF蛋白的ELISA检测;（3）皮瓣术后第十一天用数码相机进行背部皮瓣拍照扫描,应用Image-Pro Plus 6.0软件分析计算各组皮瓣存活率;（4）术后十一天扫描后各组随机抽取5只大鼠处死,在皮瓣存活区域取材,进行组织学检测,包括HE染色及内皮细胞的CD31免疫组织化学染色,用来检测微血管密度（Microvessel density,MVD）。结果:1.术后A组皮瓣存活质量较B、C、D、E组高。2.A组、B组大鼠皮瓣术后第2d、4d、7d、14d外周血中的VEGF持续高表达且逐渐升高,第七天时达到峰值,第十四天时较术后第二天明显下降。不同时期A组外周血中VEGF浓度水平明显高于B组,差异有统计学意义（P<0.05）。C组、D组、E组各个时期血清中VEGF浓度无明显变化（P>0.05）。不同时期A组外周血中VEGF浓度水平明显高于C组、D组、E组,差异有统计学意义（P<0.05）。3.皮瓣术后十一天大体观察、扫描,各组皮瓣存活率分别为:A组:86.4%±5.5%;B组:62.5%±4.7%;C组:52.3%±4.2%;D组:45.8%±3.6%;E组:32.4%±1.7%,A组、B组、D组、E组组间皮瓣存活率比较差异有统计学意义（P<0.05）;A组、C组、D组、E组组间皮瓣存活率比较差异有统计学意义（P<0.05）。4.术后十一天,HE染色及内皮细胞的CD31免疫组化染色结果均显示A组中毛细血管密度远远大于其他四组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:BMSCs与VEGF 165基因转染的HUVEC共移植能促进缺血性皮瓣的存活,具有促进血管生成的能力。