研究背景：急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是临床常见病，发病率高。由于急性胰腺炎发病急，病情发展快而复杂，可从最初的胰腺组织的局部病变迅速发展成为全身炎症反应综合征(systematic inflammatory response syndrome, SIRS)、脓毒症、脓毒症休克乃至多器官功能衰竭，甚至死亡，治疗非常棘手，虽然临床采用综合疗法进行治疗，但效果并不满意，总体死亡率仍然高达5％～13.6％，因此研究新的有效药物具有重要意义。目的：急性胰腺炎是由各种原因引起的全身炎症反应综合征，脓毒症是由感染因素导致的SIRS，又称SIRS亚型。鉴于SIRS贯穿急性胰腺炎的病理生理过程，早期阶段的SIRS如果得不到有效控制，晚期将出现脓毒症、脓毒症休克，发生多器官功能衰竭的风险将大为增加，病死率也将增加4～5倍。因此，急性胰腺炎的本质是SIRS和脓毒症。青蒿琥酯(artesunate，AS)为有效的抗疟药物。前期我们课题组发现，青蒿琥酯可显著提高脓毒症模型动物的存活率，显著降低模型小鼠体内血清内毒素、血清TNF-α、IL-6等炎症细胞因子的水平。鉴于急性胰腺炎的本质是SIRS和脓毒症，而青蒿琥酯具有良好的治疗SIRS和脓毒症作用，我们开展了青蒿琥酯治疗AP的研究：在建立雨蛙素联合脂多糖致AP小鼠模型的基础上，进行青蒿琥酯对急性胰腺炎模型小鼠的治疗作用研究。研究方法：1.青蒿琥酯对急性胰腺炎模型小鼠的治疗作用⑴急性胰腺炎模型小鼠的制模方法采用雨蛙素联合脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)致小鼠急性胰腺炎模型：用剂量为100μg/kg的雨蛙素对小鼠进行腹腔注射，连续6次给药，每次需间隔1小时，在最后一次注射雨蛙素后立即腹腔注射剂量为10mg/kg的LPS，完成造模。⑵青蒿琥酯对急性胰腺炎模型小鼠的治疗作用将60只昆明种小鼠随机分为正常组、模型组和AS治疗组，每组12只，其中治疗组为3个浓度(AS5.0mg/kg，AS2.5mg/kg，AS1.5mg/kg)的AS组。正常组小鼠给予生理盐水；模型组小鼠在造模后，平行给予生理盐水；治疗组在造模完成后0小时和4小时肌肉注射不同浓度的青蒿琥酯。在造模完成后18小时，所有组别的小鼠采取眼眶取血，脱臼处死小鼠，留取胰腺组织，并进行以下工作：①胰腺和周围组织的大体形态学观察；②胰腺组织病理学评分：取胰腺头部进行HE染色，镜下观察其组织形态学，并采用双盲法按Rongione法对胰腺组织病理学评分；③计算胰腺系数：胰腺系数=胰腺湿重(毫克)/小鼠体重(克)；④组织、血清生化指标检测：用试剂盒测定胰腺组织中胰蛋白酶、脂肪酶、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活力和丙二醛(malondialdehyde，MDA)的含量，以及血清淀粉酶(amylase，AMS)活力。采用软件SPSS16.0对所测得的数据进行统计学分析。2.青蒿琥酯对重症急性胰腺炎模型(SAP)大鼠的治疗作用⑴重症急性胰腺炎模型大鼠模型的制作方法采用逆行性胆胰管注射3.5%牛黄胆酸钠方法建立SAP大鼠模型。⑵青蒿琥酯对重症急性胰腺炎大鼠模型的治疗作用。将48只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、SAP模型组，AS治疗组(5.00mg/kg,3.5mg/kg,1.75mg/kg,0.7mg/kg)和乌司他丁(US)组，每组6只。除正常组以外，各组采用逆行性胆胰管注射牛黄胆酸钠方法制作SAP大鼠模型后，4个AS组在0小时和4小时给予不同剂量的青蒿琥酯治疗，连续三天给药，每次间隔24小时。US组造模后平行给予乌司他丁制剂10000U/kg。正常组不给予任何操作，假手术组造模后平行给予生理盐水。第三天给药结束后，采用腹主动脉取血，同时摘取胰腺组织做病理学检查、生存曲线及各项生化指标检测，主要包括胰腺系数、组织脂肪酶活力和SOD活力、组织MDA含量，血清AMS活力等。3.青蒿琥酯对急性胰腺炎治疗作用的分子机制研究⑴大鼠胰腺腺泡细胞分离和培养采用胶原酶消化法分离SD大鼠原代胰腺腺泡细胞，将细胞分为正常组、脂多糖组、AS干预脂多糖组、AS组。脂多糖终浓度为1μg/mL，AS干预组先加入终浓度为10μg/mL的AS，2h后加入脂多糖孵育。加入脂多糖6h后进行指标检测.⑵各项指标检测①应用半定量RT-PCR和ELISA法分别检测AS处理对LPS诱导的大鼠胰腺腺泡细胞TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA表达及蛋白释放的影响。②应用半定量RT-PCR技术检测大鼠胰腺腺泡细胞经青蒿琥酯或LPS处理前后，其TLR2、TLR4和p65mRNA表达的变化情况。主要结果：1.青蒿琥酯对重症急性胰腺炎大鼠模型的治疗作用⑴胰腺组织观察：不同剂量AS组小鼠和大鼠胰腺组较模型组血管充血情况减轻、出血点明显减少，颜色接近正常组，胰腺系数较模型组有显著降低。⑵胰腺组织的病理学评分：①AS组的胰腺组织较模型组在坏死、出血和炎性浸润方面较模型组小鼠和大鼠有不同程度的减轻。②Rongione法病理学评分结果：治疗组与模型组相比，胰腺损伤的组织病理学评分均降低，有显著性差异(P<0.05)，各AS组间有一定的量-效关系趋势，但各组间无显著差异(P>0.05)。⑶组织、血清生化指标检测：①组织脂肪酶、蛋白酶和SOD活力、MDA含量测定：与正常组比较，模型组小鼠组织胰脂肪酶、胰蛋白酶活力和MDA含量有显著增加(P<0.01)，AS组与模型组比较，其各项指标都有降低(P<0.05)，各AS组间有一定的量-效关系趋势，但各组间无显著差异(P>0.05)。同时与模型组比较，AS组的SOD活力有明显升高。②模型组的AMS活力较正常组明显升高，而AS各组较模型组有明显降低。2.青蒿琥酯对重症急性胰腺炎大鼠模型治疗作用的机制研究。⑴青蒿琥酯能够抑制由LPS诱导的促炎性因子IL-1β和IL-6的分泌。⑵青蒿琥酯对LPS诱导产生的急性胰腺炎大鼠胰腺细胞的TLR2、TLR4和p65的表达产生抑制作用。结论：1.青蒿琥酯能明显改善急性胰腺炎模型小鼠胰腺组织的病变情况，可显著降低其血清淀粉酶、胰腺组织脂肪酶和蛋白酶的活力，增加组织的SOD活力以及降低组织MDA含量。2.青蒿琥酯能明显改善重症急性胰腺炎模型大鼠胰腺组织的病变情况，可显著降低其血清淀粉酶、胰腺组织脂肪酶的活力，增加组织的SOD活力以及降低组织MDA含量。3.青蒿琥酯治疗急性胰腺炎的作用机制与抑制LPS诱导的TLR2、TLR4和NF-κB表达，从而减少前炎症细胞因子IL-1β及IL-6的释放有关。