[研究背景]咖啡牛奶斑（Café-au-laitmacules,CALMs）表现为相比较未累及的皮肤颜色深两至三个色调的色素沉着斑疹或斑片。在人群中发病率约为10%,约3%的新生儿有一片或者多片咖啡牛奶斑。Ⅰ型神经纤维瘤病的最典型的临床特征是咖啡牛奶斑（常≥6片）,99%的患者以咖啡牛奶斑为首发症状,多于2岁前出现。Ⅰ型神经纤维瘤病（neurofibromatosis type Ⅰ,NF1,OMIM:162200）是一种常染色体显性遗传性疾病,其主要临床特点为咖啡牛奶斑、神经纤维瘤、腋下和腹股沟雀斑、Lisch结节和骨损害。当患者仅表现为多发咖啡牛奶斑时,除NF1,其还可能是Legius综合征、LEOPARD综合征、Watson综合征、家族性进行性色素沉着和色素减退症等遗传综合征的早期表现。可用全外显子组测序技术进行基因检测以鉴别疾病。随着全外显子组测序技术在基因研究中的广泛应用,该技术已被证明在诊断遗传疾病中存在重要意义。[研究目的]对3例以多发咖啡牛奶斑为表现的患者进行全外显子组测序,然后经Sanger测序验证结果,以明确诊断。[研究方法]1.病例收集:病例包括2个家系与1例散发患者,共收集了 3例患者及4例正常人的临床资料和外周血样本。2.对样本的外周血DNA进行全基因组外显子组测序。首先使用PCR-free技术构建全基因组文库,使用全外显子捕获试剂盒（NanoWES Human Exome,贝瑞和康公司）。使用IIIumina NovaSeq6000高通量测序仪进行高深度测序。3.根据全外显子测序结果,对筛选的位点进行Sanger测序验证。[研究结果]1.全外显子组测序:病例1、病例2和病例3基因组DNA全外显子组测序结果显示与多发性咖啡斑相关致病基因NF2、PTPN11、KRAS、HRAS、NRAS、BRAF、RAF1、SOS1、LZTR1、MAP2K1、MAP2K2、MAS、SPRED1均未发现致病突变。病例 1NF1 基因37号外显子发生错义突变,第5546位碱基由G替换为A（c.5546G＞A）,导致蛋白质第1849位氨基酸由精氨酸改变为谷氨酰胺（p.R1849Q）。病例1父母未发生上述突变。病例2 NF1基因13号外显子发生错义突变,第1466位碱基由A替换为G（c.1466A＞G）,导致蛋白质第489位氨基酸由色氨酸改变为半胱氨酸（p.Y489C）。病例2父母未发生上述突变。病例3 NF1基因11号外显子发生无义突变,第1246位碱基由C替换为T（c.1246C＞T）,导致在416位氨基酸提前终止转录（p.R416*）。2.Sanger测序验证:对病例1及其父母,病例2及其父母和病例3全外显子所筛选的位点进行Sanger测序验证,结果与全外显子组结果契合。[结论]在本研究中,我们对3例临床表现为咖啡牛奶斑的患者进行了全外显子组测序,并用Sanger测序进行了验证,该3名患者均发现了 NF1基因的突变,最终诊断为Ⅰ型神经纤维瘤病。研究证明,全外显子组测序结合Sanger测序是早期确诊Ⅰ型神经纤维瘤病的有效方法。