【摘 要】
:
研 究 目 的 : 通 过 细 胞 工 程 的 方 法 制 备 重 组 幽 门 螺 杆 菌(Helicobacter pylori,H.pylori)细胞空泡毒素抗原(vacuolating cytotoxin antigen,VacA)的单克隆抗
论文部分内容阅读
研 究 目 的 : 通 过 细 胞 工 程 的 方 法 制 备 重 组 幽 门 螺 杆 菌(Helicobacter pylori,H.pylori)细胞空泡毒素抗原(vacuolating cytotoxin antigen,VacA)的单克隆抗体(简称单抗),并初步研究其应用。为制备检测 VacA 的试剂盒及探讨 VacA 的致病机制奠定基础。 方法:本实验分两部分进行 一 、重组 VacA 的表达与纯化:在已构建的基因工程(pQE30-V-DH5α)基础上,大量诱导表达获得重组蛋白 VacA。用 SDS-PAGE 分析表达形式,Western blot 鉴定其抗原性, Ni2+-NTA 树脂纯化表达蛋白,SDS-PAGE 鉴定其纯度,Bradford 法测定蛋白浓度。用重组蛋白建立检测小鼠 VacA 抗体的间接 ELISA,评价重组蛋白免疫原性。 二、 VacA 单克隆抗体的制备和初步应用:1.以纯化所得 VacA 为抗原免疫 BALB/c 小鼠,40 天后间接 ELISA 测小鼠尾静脉血以检测有无抗体产生;2.将脾细胞与骨髓瘤细胞用 50%聚乙二醇(PEG)融合,HAT 培养基培养选择出融合细胞,用建立的间接 ELISA 法筛选分泌VacA 抗体的细胞;3. 有限稀释法克隆化培养,间接 ELISA 法检测能稳定分泌抗 VacA 抗体的阳性细胞株,b.v 公司的抗体亚型检测试剂盒测定抗体类别;4.用间接 ELISA 法测定体外传代培养的 zhD4 细胞株分泌抗体的稳定性;5. 大量制备 zhD4 细胞株小鼠腹水后,饱和硫酸铵沉淀法初步纯化,间接 ELISA 法测定其效价,Bradford 法测定蛋白含量;6.用制备的单克隆抗体建立初步应用于胃粘膜中 VacA 的检测。
其他文献
随着生活条件的迅速改善,社会人群老龄化等因素,糖尿病(DM)发病率呈逐渐上升的趋势。预测到2010年全世界DM患者可达2亿,到2015年将上升到3亿。与非糖尿病人群相比较,糖尿病人
生物起搏近年来已成为心脏起搏的研究热点。所谓生物起搏,就是利用具有起搏或传导功能的细胞、组织来替代病变或损伤的起搏和传导组织,重建心脏正常的起搏和传导功能。目前,实现
【目的】大花植物(花粉和花蜜)能否为特殊的寒地温室内各种昆虫的成虫期补充营养,提供食物来源进而影响温室内天敌的控害功能是当前保护地内防控害虫的关键的科学问题之一。【方
目的:通过体表创伤后肾脏组织中HIF-1α、PPAR-γ、TGF-β1表达的变化及HIF-1α mRNA表达的调控,对创伤后肾脏缺血、缺氧机制进行探讨。 方法:大鼠轻度腹腔麻醉后,放置
本研究首先利用由oligo6.0,NCBIBlast和PrimerPremier5软件去设计和筛选全EBV基因组cDNA探针,我们将这些探针的长度限定在300-600mer。然后,通过PCR和RT-PCR方法从B95-8细胞
随着互联网Web2.0时代的到来,近两年兴起了一种新型文献交流网站,即C2C文档网站,其独特的文献采集和销售模式创新并影响着文献传播渠道和途径,对学术文献传播将产生不可限量
石英谐振式力传感器的结构模型与性能分析*董永贵王朱惠忠冯冠平(清华大学精密仪器与机械学系北京100084)0引言称重测力传感器是使用相当广泛的一种传感器。应变式力传感器因发展历
在本研究中,先用生物信息学的方法对问号钩体赖株趋化相关的基因进行了分析。提示我们问号钩体赖株MCPs蛋白可能行使与大肠埃希菌K12MCPs相似或相同的功能。通过对大肠埃希菌K
戊型肝炎(Hepatitis E, HE)是一种经粪口途径传播的急性传染病,在世界各地发展中国家广泛流 行,在发达国家也有散发,严重危害着人类健康。HE病死率约为0.4%,远较其他各型肝炎高