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蛋白质饲料短缺问题已经成为制约我国畜牧业发展的瓶颈之一。辣木属于辣木科辣木属植物,其叶片中含有大量的营养物质及生物活性物质,尤其以蛋白质的含量最为丰富。辣木叶被批准为人新型食品资源,也具有成为蛋白质饲料或者功能性饲料添加剂的潜力。在本研究中,首先以小鼠肠道类器官为研究模型,探究辣木叶水提取物对类器官生长发育的影响;随后,利用TNF-α刺激类器官炎症,从肠道类器官的表面积、发芽率、炎性因子的表达水平以及肠道干细胞的增殖水平等方面,验证辣木叶水提取物对TNF-α诱导的类器官炎症的恢复作用;其次,利用3%的DSS构建急性结肠炎小鼠模型,灌胃2000mg/kg剂量的辣木叶水提取物探索其对小鼠结肠炎的影响,从结肠长度的变化、肠道组织形态变化、杯状细胞数量、炎性因子表达和信号通路等方面探究辣木叶水提取物对小鼠结肠炎的缓解作用;最后,测定了辣木叶粉中营养成分的含量,并在杜×长×大断奶仔猪日粮中添加不同浓度的辣木叶粉,以探究辣木叶粉对断奶仔猪生产性能以及免疫水平的影响。本研究证明辣木叶水提取物可以通过抑制炎性因子的表达以及肠道干细胞的过度增殖抑制炎症。同时,在断奶仔猪中添加辣木叶粉可以促进仔猪的生产性能、降低腹泻率,并减轻断奶仔猪断奶应激。具体研究结果如下:1、辣木叶水提取物促进肠道类器官的生长并抑制TNF-α诱导的类器官炎症肠道类器官因含有所有肠道细胞的类型,已被广泛应用到肠道的发育以及疾病的发展等研究中。本研究首先成功分离并培养了小鼠的肠道类器官,发现在培养基中添加辣木叶水提取物可以极显著促进肠道类器官的生长,增加其表面积(P<0.01)。TNF-α在炎症的发展过程中起着核心作用,能够持续地刺激并诱导炎症,本试验利用TNF-α刺激肠道类器官炎症,探究补充辣木叶水提取物对TNF-α诱导的类器官炎症的影响。结果表明,添加辣木叶水提取物可以减轻TNF-α对肠道类器官的损伤,降低炎性因子的基因表达、抑制肠道干细胞的过度增殖(P<0.01)。以上结果表明,辣木叶水提取物通过抑制炎性因子的表达,并维持合适的肠道干细胞数量,维护了肠绒毛-隐窝的再生稳态并有利于肠道健康。2、辣木叶水提取物缓解DSS诱导的小鼠结肠炎本试验在饮水中添加3%的DSS诱导小鼠急性结肠炎,并灌胃2000 mg/kg的辣木叶水提取物探究其对小鼠结肠炎的缓解作用。结果发现,相比于空白对照组,DSS诱导的结肠炎小鼠出现明显的病理变化,结肠炎小鼠结肠长度明显缩短(P<0.01)。肠黏膜屏障主要由肠道上皮细胞连接复合体组成的机械屏障、黏蛋白为主要成分的黏膜化学屏障、肠道相关免疫细胞构成的免疫屏障以及肠道内正常菌群组成的生物屏障组成。肠上皮的完整性是保持肠黏膜屏障机械屏障的必要条件。DSS诱导的结肠炎使肠绒毛结构损伤,而添加辣木叶水提取物维护了肠绒毛结构的完整性;此外,辣木叶水提取物能够恢复由结肠炎造成的杯状细胞缺失,极显著恢复杯状细胞的数量(P<0.01),从而增加黏液的分泌,维护肠黏膜的化学屏障。另外一方面,通过病理打分结果显示,灌胃辣木叶水提取物的小鼠的病理打分要极显著低于DSS造炎组(P<0.01)。以上结果表明,辣木叶水提取物可以通过维护肠黏膜屏障的完整性缓解DSS诱导的肠炎。为了进一步探究辣木叶水提取物对结肠炎的缓解作用,我们利用荧光定量PCR检测炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1β基因表达量,与体外类器官模型一致的是,辣木叶水提取物可以极显著降低由DSS诱导的炎性因子基因的高表达(P<0.01),同时能够抑制STAT3蛋白的激活。肠道隐窝位置的肠道干细胞能够分化为多种肠道细胞,这种分化潜能对肠道损伤后的修复十分关键,但是,肠道干细胞的过度增殖却容易导致恶性癌变,因此维护肠道干细胞的数量是维护肠道稳态的关键。在本试验中,DSS诱导的结肠炎促进增殖相关基因的表达,而辣木叶水提取物则极显著抑制增殖相关基因的过度表达(P<0.01)。以上结果说明,辣木叶水提取物可以通过维护肠道黏膜屏障、抑制炎症和肠道干细胞的过度增殖缓解结肠炎。3、饲料中添加辣木叶提高断奶仔猪的生产性能和免疫水平辣木叶中含有丰富的营养成分及生物活性物质,具有作为蛋白质饲料添加的潜力。在本试验中,我们测定了辣木叶中的营养成分,其中蛋白质的含量占25.8%,粗纤维的含量占7.0%,粗脂肪的含量占3.1%,其营养成分丰富,蛋白质、粗纤维、脂肪的比例合理。在本试验中,在日粮中分别添加2%、4%、6%的辣木叶以进一步探究辣木叶对杜×长×大断奶仔猪生产性能及免疫水平的影响。结果表明,不同浓度的辣木叶粉均可以提高断奶仔猪的平均日增重,并降低料肉比,其中添加4%的辣木叶粉料肉比最低;另一方面,对断奶仔猪腹泻率的统计结果表明,添加不同浓度的辣木叶粉极显著降低了断奶仔猪的腹泻率(P<0.01);炎性因子的表达水平在一定程度上反映了断奶仔猪的应激状态,通过Elisa检测不同处理组断奶仔猪血清中的TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10的表达量,结果表明,饲喂2%、4%、6%的辣木叶粉均极显著降低了断奶仔猪血清中的TNF-α、IL-6的表达水平(P<0.01),但是对IL-8的表达没有显著影响(P>0.05),同时提高了 IL-10的表达,说明在日粮中添加辣木叶粉可以抑制促炎因子的表达水平,提高抗炎因子的表达水平。可见,饲粮中添加4%辣木叶粉可以提高断奶仔猪的生产性能,提高仔猪的平均日增重、饲料转化率、降低腹泻率并减轻促炎因子的表达,促进抑炎因子的表达,进而提高断奶仔猪的免疫水平。