目的:2020年版《中国药典》收载胆南星为制天南星细粉与牛、羊或猪胆汁经加工而成,或由生天南星细粉与牛、羊或猪胆汁经发酵加工而成。胆南星具有清热化痰、息风定惊的功效。临床上常用于治疗痰热咳嗽、中风痰迷、癫狂惊痫。市场主流的胆南星产品原料多为猪胆汁,而古代理论有“牛胆汁制去燥烈而清润”的论述,课题组前期通过不同胆汁制胆南星在化学成分和药效上的对比,证明了传统理论“牛胆汁制去燥烈而清润”的科学性。课题组的前期市场调研发现,胆南星在主治神经类疾病的医院常常用于治疗癫痫,且对优质胆南星常常供不应求。牛胆汁制胆南星在治疗癫痫方面相对于猪胆汁制胆南星是否也有明显的优势呢?因此本课题组在前期研究的基础上,对牛胆汁制胆南星和猪胆汁制胆南星对癫痫的治疗作用进行对比研究,为临床治疗癫痫选择适合的胆南星种类提供实验依据。并初步建立牛胆汁制胆南星质量标准,为牛胆汁制胆南星的质量与疗效提供保证。材料与方法:材料:天南星采自四川、东北天南星采自辽宁省本溪市、异叶天南星购自吉林梅河、经辽宁省药品检验检测院王维宁教授鉴定为天南星科植物一把伞Arisaema erubescens（Wall.）Schott的干燥块茎、天南星科植物东北天南星Arisaema amurense Maxim.的干燥块茎、异叶天南星Arisaema heterophyllum Bl.的干燥块茎;虎掌南星购自四川仟源有限公司经辽宁中医药大学尹海波教授鉴定为天南星科植物掌叶半夏Pinellia pedatisecta Schott.的干燥块茎;猪胆汁、牛胆汁购自大连澳东市场。方法:1.不同来源天南星中夏佛塔苷和异夏佛塔苷的含量测定采用HPLC法,色谱柱为Waters C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相:甲醇:0.1%冰醋酸（31:69）,流速为1.0 m L·min-1,检测波长为272 nm,柱温为30℃,进样量:10μL,测定天南星、东北南星、异叶天南星、虎掌南星中夏佛塔苷和异夏佛塔苷的含量。2.天南星炮制成胆南星后夏佛塔苷和异夏佛塔苷的含量变化采用HPLC法,色谱柱为Waters C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,柱温为30℃,流动相:甲醇:0.1%冰醋酸（31:69）,流速为1.0 m L·min-1,检测波长为272 nm,进样量:10μL,测定天南星（一把伞）、猪胆汁制胆南星和牛胆汁制胆南星中夏佛塔苷和异夏佛塔苷的含量并进行对比。3.胆南星对PTZ诱导的癫痫大鼠的作用机制研究为排除个体差异的影响,首先进行PTZ腹腔注射,点燃大鼠癫痫模型,Racine评分3级以上的大鼠视为可用,将点燃成功的大鼠随机分为模型组、阳性药组、猪胆汁制胆南星组、牛胆汁制胆南星组、牛胆汁组。每天早上8:00,模型组和空白组大鼠灌胃给予生理盐水（给药量为1 m L/100 g）,猪胆汁制胆南星组、牛胆汁制胆南星组,牛胆汁组大鼠按照0.252 g·m L-1灌胃给予相应药物,阳性药组灌胃给与丙戊酸钠(120mg·kg-1·d-1),下午1:00各组大鼠给予阈下剂量的PTZ(45 mg·kg-1)进行腹腔注射,观察大鼠1 h,并记录大鼠体重、Racine评分和癫痫情况。ELISA法检测大鼠海马组织中SOD、MDA、GABA、GLU的含量;RT-PCR法检测大鼠海马组织中TNF-α、IL-1β、IL-6的表达;Western Blot法检测各组大鼠海马组织中Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达。4.胆南星及其化学成分单体对PTZ诱导的HT22小鼠海马神经元细胞的作用选取HT22小鼠海马神经元细胞,CCK-8法检测不同浓度PTZ、天南星、胆南星及其化学成分单体对HT22细胞增值率的影响;体外培养细胞分别以适宜浓度PTZ造模24 h,吸取上清液后加入适宜浓度的药物孵育24 h后ELISA法检测HT22细胞上清液中GABA、GLU和间隙连接蛋白43（Cx43）、间隙连接蛋白32（Cx32）的表达;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR检测HT22小鼠海马神经元细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的表达情况。5.牛胆汁制胆南星质量标准初探初步建立牛胆汁制胆南星质量标准,制订内容主要包括浸出物测定项、薄层鉴别项、水分检查项、灰分检查项、含量测定项等五个方面。结果:1.不同来源天南星中夏佛塔苷和异夏佛塔苷的含量测定不同来源的天南星中这两种成分的含量差异较大,其中天南星（一把伞）中夏佛塔苷和异夏佛塔苷的含量最高,东北南星次之,异叶天南星的含量较低,未在虎掌南星中检测到夏佛塔苷和异夏佛塔苷。2.天南星炮制成胆南星后夏佛塔苷和异夏佛塔苷的含量变化天南星（一把伞）炮制成胆南星后,夏佛塔苷和异夏佛塔苷含量降低。3.胆南星对PTZ诱导的癫痫大鼠的作用机制研究除空白组外,其余大鼠在腹腔注射PTZ后均有不同程度的癫痫发作;与模型组相比,猪胆汁制胆南星组、牛胆汁制胆南星组、牛胆汁组和阳性药组大鼠的发作级别显著降低（P＜0.01）,猪胆汁制胆南星组、牛胆汁制胆南星组和阳性药组大鼠的发作潜伏期均显著延长（P＜0.05,P＜0.01）,其中牛胆汁制胆南星组较猪胆汁制胆南星组在降低癫痫发作级别及延长癫痫大鼠的发作潜伏期方面表现出优势;与空白组相比,模型组大鼠GABA、SOD的含量显著下降（P＜0.01）,MDA、GLU的含量显著升高（P＜0.01）;与模型组相比,猪胆汁制胆南星组、牛胆汁制胆南星组和阳性药组GABA、SOD含量显著升高（P＜0.01）,牛胆汁组SOD含量显著升高（P＜0.01）,猪胆汁制胆南星组、牛胆汁制胆南星组、牛胆汁组和阳性药组GLU、MDA含量显著下降（P＜0.05,P＜0.01）;与空白组相比,模型组TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平增加（P＜0.01）;与模型组相比猪胆汁制胆南星组、牛胆汁制胆南星组、牛胆汁组、阳性药组TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平显著降低（P＜0.01）,与猪胆汁制胆南星组相比牛胆汁制胆南星组降低TNF-α、IL-1β和IL-6的表达更显著;与空白组相比,模型组大鼠海马组织中Bcl-2的表达减少（P＜0.05）,Caspase-3的表达增加（P＜0.01）,与模型组相比,猪胆汁制胆南星组、牛胆汁制胆南星组、牛胆汁组、阳性药组大鼠海马组织中Bcl-2表达增加,Caspase-3表达减少（P＜0.05）。4.胆南星及其化学成分单体对PTZ诱导的HT22小鼠海马神经元细胞的作用PTZ诱导的HT22细胞实验结果表明,浓度为30 mmol·L-1时,PTZ对HT22细胞的抑制作用最强（P＜0.01）,浓度为150μg·m L-1时天南星、猪胆汁制胆南星、牛胆汁制胆南星、夏佛塔苷、异夏佛塔苷、鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸、阳性药的细胞增殖率最显著（P＜0.01）;与空白组相比,模型组HT22细胞中GLU、Cx43和Cx32蛋白表达水平可显著增加（P＜0.01）,GABA蛋白的表达水平降低（P＜0.01）;与模型组相比,猪胆汁制胆南星组、牛胆汁制胆南星组、阳性药组、鹅去氧胆酸组、猪去氧胆酸组中GLU、Cx43和Cx32的表达水平均显著降低,GABA的表达水平显著升高（P＜0.05,P＜0.01）;与模型组相比,夏佛塔苷组可升高GABA表达水平但是没有显著性差异（P＞0.05）,降低Cx43的表达水平（P＜0.01）,降低Cx32和GLU的表达水平但是无显著性差异（P＞0.05）;异夏佛塔苷可显著降低GLU、Cx43和Cx32的表达水平（P＜0.01）,升高GABA表达水平但是没有显著性差异（P＞0.05）,另外,与模型组比较,天南星组仅对Cx43有显著抑制作用（P＜0.01）;与空白组相比,模型组G0/G1期细胞百分比显著升高（P＜0.01）,S期细胞百分比显著降低（P＜0.01）;与模型组相比,牛胆汁制胆南星组G0/G1期细胞百分比均显著降低（P＜0.01）,S期细胞百分比均显著升高（P＜0.01）,猪胆汁制胆南星组与模型组没有显著性差异（P＞0.05）;与空白组相比,模型组TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平增加（P＜0.01）;与模型组比较,猪胆汁制胆南星组、牛胆汁制胆南星组、阳性药组TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平显著降低（P＜0.01）,天南星组TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平略有降低,但是没有显著性差异（P＞0.05）。5.牛胆汁制胆南星质量标准初探测得7批牛胆汁制胆南星水分检查项的含量范围为4.20%～8.42%,平均值上浮20%,暂拟定牛胆汁制胆南星水分不得过9.00%;总灰分的含量范围为4.27%～7.90%,平均值上浮20%,暂拟定牛胆汁制胆南星总灰分不得过7.00%;醇溶性浸出物的含量范围为7.87%～11.69%,平均值下浮20%,暂拟定牛胆汁制胆南星浸出物不得少于7.00%;甘氨胆酸的含量范围为0.08～0.17%,平均值下浮20%,暂拟定牛胆汁制胆南星中甘氨胆酸的含量不得少于0.09%。结论:1.不同来源的天南星夏佛塔苷和异夏佛塔苷的含量差异较大,可作为区分不同来源天南星的依据。天南星（一把伞）炮制成胆南星后,夏佛塔苷和异夏佛塔苷含量降低。2.胆南星对PTZ诱导的癫痫大鼠和HT22细胞有显著的治疗作用,其中牛胆汁制胆南星在体内外治疗癫痫方面均表现出优势。3.制订的牛胆汁制胆南星质量标准,可为饮片分级和牛胆汁制胆南星饮片的质量控制提供参考。