木棉花黄酮的提取分离及祛痘功效研究

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痤疮,是一种发生在皮脂腺及毛囊中的慢性炎症,对于痤疮的治疗,相比于抗生素类药物,人们越来越关注天然植物源化合物的祛痘功效。木棉花主要分布于我国南方,除了具有观赏价值外,木棉花中还含有丰富的化学成分,含有黄酮类,有机酸类,甾体类,三萜类等化学成分,其中黄酮类含量最为丰富。本文选用木棉花为原料,采用超声辅助醇提技术提取木棉花中的黄酮类化合物,利用大孔树脂对提取的木棉花黄酮进行纯化,对木棉花黄酮的体外抑菌活性、抗炎活性、抗氧化活性及美白活性进行研究,并将其应用于化妆品中研究其祛痘功效主要研究内容及结论如下:(1)采用超声辅助醇提技术对木棉花黄酮进行提取,在单因素实验的基础上采用正交实验优化了木棉花黄酮的最佳提取工艺,最佳的提取工艺为:料液比1:60,提取时间40min,乙醇体积分数45%,提取温度70℃。在此条件下木棉花黄酮的得率为10.07±0.29%。(2)采用大孔树脂对木棉花黄酮进行纯化,通过对比8种大孔树脂对木棉花黄酮的吸附率和解吸率,发现D101效果最佳,解吸液乙醇的体积浓度为60%时解吸效果最好;其最佳的动态吸附-解析条件为:上样体积2 BV,解析液洗脱体积0.625 BV。纯化后木棉花黄酮的纯度由32.5%提高至98.2%。借助HPLC-ESI-MS联用分析技术分离鉴定出40种成分,其中含量最多的成分为异芒果苷、奎宁酸和槲皮素-3-葡萄糖醛酸苷,这三个成分的相对含量之和为64.56%。(3)对木棉花黄酮的抗氧化活性进行了研究,采用ABTS·+和DPPH自由基清除实验得出木棉花黄酮具有较强的抗氧化能力,其效果仅略低于阳性药物Vc。纯化后的木棉花黄酮具有优异的美白功效,对导致产生黑色素的酪氨酸酶有非常显著的抑制效果,木棉花黄酮对酪氨酸酶的抑制率高于α-熊果苷。通过斑马鱼胚胎黑色素抑制实验,可知当纯化后的木棉花黄酮浓度为1 g/L时对斑马鱼胚胎黑色素抑制率为12%,具有显著的美白活性。通过抑菌圈实验探究木棉花黄酮的抑菌功效,当木棉花黄酮的浓度为12.5g/L,对表皮葡萄球菌的抑菌圈直径为20.33±0.47 mm,表现为高敏,对于痤疮丙酸杆菌的抑菌圈直径为11.67±0.47 mm,表现为中敏。使用小鼠巨噬细胞Raw264.7建立TNF-α和IL-6的炎症模型测定纯化后的木棉花黄酮的抗炎效果,实验结果为,当木棉花黄酮的浓度为0.5~2.0 g/L时,对促炎因子TNF-α的产生具有抑制效果,且抑制效果呈现剂量依赖关系。当木棉花黄酮的浓度为0.25~1.0 g/L时,对促炎因子IL-6的产生具有抑制效果,抑制效果呈现剂量依赖关系,且当木棉花黄酮溶液的质量浓度为1.0 g/L时,对IL-6的抑制效果等同于阳性对照欧舒敏(1%)。(4)根据体外祛痘功效实验结果,将木棉花黄酮提取物添加至基础面霜中进行人体测试,痤疮受试者使用木棉花黄酮面霜28天后,皮肤亮泽度,油脂分泌量和经皮水分散失(Trans Epidermal Water Loss,TEWL)都有所改善,面部的炎症状况都呈现下调趋势,通过16Sr DNA测序技术,测得在使用木棉花黄酮面霜28天后,痤疮受试者面部的痤疮丙酸杆菌含量降低,菌群丰富度提高,皮肤菌群的失衡状态得到改善。
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