论文部分内容阅读
目的:通过观察通窍活血汤对急性缺血性脑卒中的治疗效果,以及通窍活血汤对Th1、Th2相关细胞因子数量变化的影响,从Th1/Th2免疫平衡的视角,了解通窍活血汤防治急性缺血性脑卒中的作用机理,为中医药防治急性缺血性脑卒中对免疫方面的影响提供研究基础。方法:1.临床研究:在柳州市中医医院（柳州市壮医医院）神经内科病区中选择符合本临床试验研究标准的急性缺血性脑卒中病人60例,并使用数字随机法分为对照组30例以及通窍活血汤组30例。对照组的病人使用一般常规治疗,通窍活血汤组的病人在一般常规治疗上再加以口服中药汤剂通窍活血汤,两组病人的治疗疗程均为14天。在治疗前的第1天及治疗后14天分别对两组病人进行NIHSS评分和m RS评分,并采集血清标本,用流式细胞仪检测技术分别检测两组受试者血清中Th1、Th2细胞分泌的相关细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10的数量。2.动物实验:以健康雄性SD大鼠做为研究对象,选择Zea-Longa线栓术阻断大鼠右脑中动脉血管,制作大鼠MCAO模型,在造模后24h,使用Longa神经功能缺损评分确认造模效果,剔除不符合的大鼠后,使用随机分组的方式将MCAO大鼠分为4组,分别为模型组以及通窍活血汤高、中、低剂量组,每组大鼠各10只。再另选10只大鼠作为假手术组,处理方法与MCAO相同,但仅分离血管,不进行结扎及放置线栓。分组完成后即可开始治疗,高、中、低剂量组的大鼠分别以0.72ml/100g、0.36ml/100g、0.18ml/100g剂量的通窍活血汤配以0.28ml/100g、0.64ml/100g、0.82ml/100g体积的蒸馏水灌胃,1次/d,假手术组及模型组的大鼠则配以1ml/100g体积的蒸馏水进行灌胃,各组大鼠的疗程均为14d,并在24h、14d后使用Longa神经功能缺损程度对大鼠进行评分。在最后一次灌药评分后处死大鼠,采集脑组织标本,脑组织进行切片后行TTC染色,用Image Pro-plus6.0软件计算各组大鼠的脑梗体积百分比,另外采用RT-PCR法分别检测各组大鼠脑组织中Th1、Th2相关细胞因子IFN-γm RNA、TNF-αm RNA、IL-6 m RNA、IL-10 m RNA的表达水平。结果:1.临床实验:在临床疗效中,对照组及通窍活血汤组在治疗前的组间比较中,NIHSS评分和m RS评分均无统计学意义（P＞0.05）;治疗后,两组NIHSS评分、m RS评分较治疗前对比都有所下降,具有显著统计学意义（P＜0.01）;而与对照组比较,通窍活血汤组NIHSS评分和m RS评分下降更明显。细胞因子表达情况中,在治疗前,对照组与通窍活血汤组血清Th1、Th2细胞分泌的IFN-γ、IL-4、IL-10等因子表达无明显差异（P＞0.05）。治疗后,在Th1相关因子中,两组中的IFN-γ炎症因子水平在治疗后均呈下降趋势（P＜0.05）,而通窍活血汤组下降更明显（P＜0.01）;在Th2相关因子中,对照组在治疗后,IL-4炎症因子水平未见改变,无统计学意义（P＞0.05）,通窍活血汤组中的IL-4因子水平上升则显著表达（P＜0.01）,而两组血清中Th2细胞相关因子的IL-10水平则呈上升趋势（P＜0.05）,以通窍活血汤组上升更明显（P＜0.01）。在治疗前,两组IFN-γ/IL-4比值进行比较中,统计无差异性（P＞0.05）;而两组在治疗后同治疗前对比,其表达水平均下降（P＜0.05）,通窍活血汤组下降则更显著（P＜0.01）。2.动物研究结果提示:（1）神经功能缺损情况:造模后24h、14d两个时间点分别对五组大鼠行Longa神经功能缺损的评分,结果表明,假手术组的大鼠的评分均为0分,没有任何神经功能缺损的症状表现,而模型组大鼠则出现相关神经功能障碍的症状表现;与假手术组比较,模型组具有显著统计学意义（P＜0.01）。与模型组对比,通窍活血汤的三个治疗组在24h时的评分并无明显差别,无统计学意义（P＞0.05）。在14d后,通窍活血汤三组大鼠的评分与模型组对比有统计学意义（P＜0.05）,而高剂量组大鼠评分具有显著统计学意义（P＜0.01）,说明通窍活血汤治疗可以改善MCAO大鼠的神经功能缺损。（2）脑梗死体积百分比变化:各组大鼠切片在经过TTC试剂染色后,MCAO模型大鼠在脑的冠状区域其组织切片能见到明显的苍白色梗塞病灶,而假手术组大鼠的切片未见有梗塞病灶的表现。与假手术组对比,模型组大鼠脑切片的梗死体积百分比具有显著统计学差异（P＜0.01）;与模型组相比,通窍活血汤组三组大鼠的脑梗面积均有缩小,其梗死体积百分比降低且具有统计学差异（P＜0.05）,其中通窍活血汤高剂量组脑梗面积缩小更明显,具有显著性差异（P＜0.01）。（3）各组Th1、Th2相关炎症因子m RNA水平变化:与假手术组对比,模型组大鼠脑组织中Th1、Th2相关炎症因子IFN-γm RNA、TNF-αm RNA、IL-6 m RNA、IL-10 m RNA的表达水平均升高（P＜0.05）。与模型组相比,通窍活血汤各剂量组大鼠脑组织中IL-10 m RNA呈上升趋势（P＜0.05）,通窍活血汤高剂量组IL-10 m RNA上升更显著（P＜0.01）;IFN-γm RNA、TNF-αm RNA、IL-6 m RNA则出现不同程度的下调（P＜0.05）,高剂量组大鼠因子水平下调更显著,具有显著统计学差异（P＜0.01）。结论:1.临床研究和动物实验表明:通窍活血汤可显著降低急性缺血性脑卒中患者的NIHSS评分及m RS评分,改善患者的肢体功能障碍,提高了临床疗效;并能够显著减少MCAO模型大鼠的脑梗面积,具有改善大鼠神经功能缺损的作用。2.在Th1、Th2相关细胞炎症因子方面,通窍活血汤能够降低Th1细胞相关促炎因子IFN-γ水平在血清中的表达,并促进Th2细胞相关抑炎因子IL-4、IL-10的表达水平,调节IFN-γ/IL-4比值,减轻大脑内免疫炎症反应;在动物研究中,通窍活血汤有效抑制MCAO大鼠Th1及Th2细胞相关炎症因子IFN-γm RNA、TNF-αm RNA、IL-6 m RNA等的表达,提高Th2相关抑炎因子IL-10 m RNA水平的表达。3.通窍活血汤通过干预Th1、Th2相关细胞因子的表达水平,可能具有调节Th1/Th2免疫平衡的能力,使其趋于平衡,减少炎症反应的发生,并向Th2转移,促进卒中后大脑神经功能的恢复。